| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-23页 |
| ·丝状真菌表达系统 | 第10-17页 |
| ·丝状真菌转化方法 | 第10-15页 |
| ·选择标记 | 第15-16页 |
| ·表达载体 | 第16-17页 |
| ·脂肪酶及其应用 | 第17-21页 |
| ·脂肪酶的结构与催化性质 | 第17-18页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第18-20页 |
| ·微生物脂肪酶的研究进展 | 第20-21页 |
| ·本课题来源、研究内容和意义 | 第21-23页 |
| ·课题来源 | 第21页 |
| ·研究内容 | 第21页 |
| ·研究意义 | 第21-23页 |
| 第二章 野生型曲霉宿主的筛选标记研究 | 第23-38页 |
| ·引言 | 第23-24页 |
| ·实验材料与仪器 | 第24-26页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·实验仪器 | 第24页 |
| ·培养基和菌株 | 第24-26页 |
| ·实验方法 | 第26页 |
| ·潮霉素（hygB）敏感宿主筛选 | 第26页 |
| ·苯菌灵（Benomyl）敏感宿主筛选 | 第26页 |
| ·吡啶硫胺素（PT）敏感宿主筛选 | 第26页 |
| ·乙酰胺敏感宿主筛选 | 第26页 |
| ·结果与讨论 | 第26-36页 |
| ·潮霉素（HygB）抗性宿主的筛选 | 第26-29页 |
| ·苯菌灵（Benomyl）抗性宿主的筛选 | 第29-31页 |
| ·吡啶硫胺素（PT）抗性宿主的筛选 | 第31-34页 |
| ·乙酰胺耐受宿主的筛选 | 第34-36页 |
| ·本章小结 | 第36-38页 |
| 第三章 表达载体构建和农杆菌介导的曲霉遗传转化 | 第38-71页 |
| ·引言 | 第38-39页 |
| ·实验材料与仪器 | 第39-43页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·实验仪器 | 第39-40页 |
| ·主要培养基 | 第40-42页 |
| ·菌株和质粒 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-52页 |
| ·农杆菌介导PT 抗性基因的曲霉转化 | 第43-47页 |
| ·双元表达载体pHGW-Bn 的构建 | 第47-51页 |
| ·农杆菌介导Bn 抗性基因的曲霉转化 | 第51-52页 |
| ·双元表达载体pHGW-amdS 的构建及曲霉转化 | 第52页 |
| ·结果与讨论 | 第52-70页 |
| ·泡盛曲霉 CBS115.52 的农杆菌(含 pHGW-PT)介导转化结果 | 第52-55页 |
| ·黑曲霉SH-1 的农杆菌（含pHGW-PT）介导转化结果 | 第55-57页 |
| ·表达载体pHGW-Bn 的构建结果 | 第57-61页 |
| ·农杆菌LBA4404（含pHGW-Bn）介导泡盛曲霉转化结果 | 第61-63页 |
| ·表达载体pHGW-amdS 的构建结果 | 第63-65页 |
| ·农杆菌LBA1100（含pHGW-amdS）介导泡盛曲霉转化结果 | 第65-67页 |
| ·农杆菌LBA1100（含pHGW-amdS）介导黑曲霉转化结果 | 第67-70页 |
| ·本章小结 | 第70-71页 |
| 第四章 农杆菌介导脂肪酶基因的黑曲霉转化及其表达 | 第71-87页 |
| ·引言 | 第71页 |
| ·实验材料与仪器 | 第71-74页 |
| ·主要试剂及配方 | 第71-73页 |
| ·实验仪器 | 第73-74页 |
| ·菌株和培养基 | 第74页 |
| ·实验方法 | 第74-78页 |
| ·农杆菌介导的黑曲霉转化 | 第74-75页 |
| ·转化子表观酶活检测 | 第75页 |
| ·基因组提取 | 第75页 |
| ·转化子PCR 鉴定 | 第75页 |
| ·胞外蛋白提取及SDS-PAGE 检测 | 第75-77页 |
| ·亲和层析 | 第77页 |
| ·转化子初步发酵优化 | 第77-78页 |
| ·结果与讨论 | 第78-86页 |
| ·农杆菌介导黑曲霉转化结果 | 第78-80页 |
| ·转化子表观酶活检测结果 | 第80页 |
| ·PCR 鉴定脂肪酶转化子结果 | 第80-82页 |
| ·蛋白电泳和亲和层析检测结果 | 第82-84页 |
| ·脂肪酶活力测定 | 第84-86页 |
| ·本章小结 | 第86-87页 |
| 结论与展望 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-94页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 附件 | 第96页 |
