| 中文摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 前言 | 第11-17页 |
| 第一章 材料与方法 | 第17-21页 |
| 1.1 主要实验试剂 | 第17页 |
| 1.2 主要实验仪器 | 第17-18页 |
| 1.3 实验所需溶液配制 | 第18-21页 |
| 第二章 实验方法 | 第21-53页 |
| 2.1 Open Search检测蛋白全修饰 | 第21页 |
| 2.2 重组质粒PCDNA3.0-Flag-CDK8的构建及表达 | 第21-35页 |
| 2.2.1 CDK8的克隆 | 第21-32页 |
| 2.2.2 蛋白表达鉴定 | 第32-35页 |
| 2.3 重组质粒PQE30-HiS-CDK8的构建以及表达 | 第35-42页 |
| 2.3.1 原核质粒的构建 | 第35-40页 |
| 2.3.2 PQE30-His-CDK8在BL21中的诱导表达以及蛋白纯化 | 第40-42页 |
| 2.4 蛋白样品质谱前的处理及质谱检测分析 | 第42-46页 |
| 2.4.1 IP纯化内源性与外源性蛋白激酶CDK8 | 第42-43页 |
| 2.4.2 蛋白的胶内酶解 | 第43-46页 |
| 2.5 化学合成蛋白激酶CDK8片段检测修饰 | 第46页 |
| 2.6 质谱分析结果统计 | 第46-47页 |
| 2.7 重组突变质粒PCDNA3.0-Flag-CDK8的构建 | 第47-50页 |
| 2.7.1 CDK8截断体突变质粒的构建 | 第47-48页 |
| 2.7.2 CDK8双位点突变质粒的构建 | 第48-50页 |
| 2.7.3 突变质粒的转染表达 | 第50页 |
| 2.8 重组PQE31—His—CTD质粒/PCDNA3.0—Flag—CTD的构建 | 第50-52页 |
| 2.9 探索丝氨酸乙酰化修饰对CDK8磷酸化功能的影响 | 第52-53页 |
| 2.9.1 该修饰对CDK8磷酸化p21的功能的影响 | 第52页 |
| 2.9.2 该修饰对CDK8磷酸化CTD功能的影响 | 第52-53页 |
| 第三章 实验结果 | 第53-67页 |
| 3.1 肾癌组织样品中蛋白激酶CDK8丝氨酸位点存在乙酰化修饰 | 第53-54页 |
| 3.2 内源性、外源性蛋白激酶CDK8丝氨酸位点也广泛存在乙酰化 | 第54-59页 |
| 3.3 蛋白激酶CDK8丝氨酸乙酰化位点分布的质谱结果统计 | 第59-61页 |
| 3.4 化学合成蛋白激酶CDK8片段中丝氨酸乙酰化的质谱鉴定 | 第61页 |
| 3.5 蛋白激酶CDK8第11位丝氨酸乙酰化对其磷酸化p21功能影响 | 第61-64页 |
| 3.6 蛋白激酶CDK8第11位丝氨酸乙酰化对其磷酸化CTD影响 | 第64-67页 |
| 第四章 讨论 | 第67-71页 |
| 4.1 蛋白组学研究的重要意义 | 第67-68页 |
| 4.2 CDK8多个丝氨酸位点乙酰化与磷酸化 | 第68-69页 |
| 4.3 实验展望 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 附件 | 第75页 |
