| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 主要英文缩写词 | 第6-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-20页 |
| 1.1 HPV研究背景 | 第10-13页 |
| 1.1.1 HPV分子特点 | 第10-11页 |
| 1.1.2 HPV与肿瘤的关系 | 第11-12页 |
| 1.1.3 HPV致癌机制 | 第12-13页 |
| 1.2 HPV相关肿瘤的治疗 | 第13-17页 |
| 1.2.1 肿瘤治疗的传统方法 | 第13-14页 |
| 1.2.2 肿瘤治疗新技术 | 第14-16页 |
| 1.2.3 CRISPR/Cas9在HPV相关肿瘤治疗中的应用前景 | 第16-17页 |
| 1.3 课题研究内容 | 第17-20页 |
| 1.3.1 携带HPV18 E6E7基因的腺病毒疫苗及DC疫苗的构建及免疫原性研究 | 第17-18页 |
| 1.3.2 CRISPR/Cas9敲除HPV16/18 E6E7基因的质粒构建 | 第18-20页 |
| 第2章 携带HPV18 E6E7基因的腺病毒疫苗及DC疫苗的构建及免疫原性研究 | 第20-38页 |
| 2.1 引言 | 第20页 |
| 2.2 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.2.1 实验试剂 | 第20-21页 |
| 2.2.2 实验设备 | 第21页 |
| 2.2.3 菌株和质粒 | 第21-22页 |
| 2.2.4 细胞株 | 第22页 |
| 2.2.5 实验动物 | 第22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-32页 |
| 2.3.1 重组腺病毒疫苗rAd-HPV18 E6E7的制备 | 第22-28页 |
| 2.3.2 树突状细胞疫苗DC-HPV18 E6E7的制备 | 第28-29页 |
| 2.3.3 重组腺病毒疫苗及树突状细胞疫苗的免疫原性检测 | 第29-32页 |
| 2.4 实验结果 | 第32-36页 |
| 2.4.1 穿梭质粒pDC315-HPV18 E6E7酶切鉴定 | 第32页 |
| 2.4.2 骨架质粒pBH Glox E1△\3 cre的酶切鉴定结果 | 第32-33页 |
| 2.4.3 检测重组腺病毒疫苗E6E7的表达 | 第33页 |
| 2.4.4 纯化重组腺病毒的滴度测定 | 第33-34页 |
| 2.4.5 重组腺病毒感染DC的条件 | 第34-35页 |
| 2.4.6 Western Blot检测树突状细胞疫苗E6E7表达 | 第35页 |
| 2.4.7 ELISPOT检测细胞免疫反应 | 第35-36页 |
| 2.5 讨论 | 第36页 |
| 2.6 本章小结 | 第36-38页 |
| 第3章 CRISPR/Cas9敲除HPV 16/18 E6E7基因的质粒构建 | 第38-48页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 实验材料 | 第38-39页 |
| 3.2.1 实验设备 | 第38-39页 |
| 3.2.2 菌株和质粒 | 第39页 |
| 3.2.3 工具和内切酶 | 第39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-42页 |
| 3.3.1 gRNA序列的设计与合成 | 第39-40页 |
| 3.3.2 寡核苷酸退火连接 | 第40页 |
| 3.3.3 载体质粒lentiCRISPR-V2酶切及胶回收 | 第40-41页 |
| 3.3.4 连接目的片段与载体 | 第41页 |
| 3.3.5 连接产物的转化 | 第41页 |
| 3.3.6 连接产物的提取及鉴定 | 第41-42页 |
| 3.4 实验结果 | 第42-45页 |
| 3.4.1 慢病毒质粒lentiCRISPR-V2酶切结果 | 第42页 |
| 3.4.2 慢病毒质粒lentiCRISPR-V2胶回收结果 | 第42页 |
| 3.4.3 重组质粒测序鉴定结果 | 第42-45页 |
| 3.5 讨论 | 第45页 |
| 3.6 本章小结 | 第45-48页 |
| 结论 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 攻读硕士学位期间所发表的学术论文 | 第56-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
