| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 一、引言 | 第13-28页 |
| 1.1 棉花 | 第13-16页 |
| 1.1.1 现代棉花进化起源 | 第13页 |
| 1.1.2 棉纤维发育过程 | 第13-15页 |
| 1.1.3 植物激素对棉纤维发育的调控 | 第15-16页 |
| 1.2 植物细胞壁 | 第16-21页 |
| 1.2.1 纤维素 | 第16-17页 |
| 1.2.2 植物次生细胞壁 | 第17-18页 |
| 1.2.3 植物次生细胞壁合成的调控机制 | 第18-21页 |
| 1.3 植物NAC转录因子 | 第21-26页 |
| 1.3.1 NAC转录因子的结构及分类 | 第21-22页 |
| 1.3.2 NAC转录因子的生物学功能 | 第22-26页 |
| 1.4 立题依据 | 第26-28页 |
| 二、材料与方法 | 第28-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-30页 |
| 2.1.1 菌种和载体 | 第28页 |
| 2.1.2 植物材料 | 第28页 |
| 2.1.3 化学试剂 | 第28页 |
| 2.1.4 工具酶 | 第28页 |
| 2.1.5 常用储液及缓冲液 | 第28-29页 |
| 2.1.6 常用培养基 | 第29-30页 |
| 2.1.7 常用仪器 | 第30页 |
| 2.1.8 PCR分析扩增试剂 | 第30页 |
| 2.1.9 DNA测序 | 第30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-39页 |
| 2.2.1 棉花材料的准备 | 第30页 |
| 2.2.2 棉花基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.2.3 CTAB法提取棉花RNA | 第31-32页 |
| 2.2.4 棉花RNA的消化、纯化及逆转录 | 第32页 |
| 2.2.5 PCR反应 | 第32-34页 |
| 2.2.6 qRT-PCR分析 | 第34-35页 |
| 2.2.7 GhFSN1转基因棉花开花后1 8天纤维转录组测序分析及验证 | 第35页 |
| 2.2.8 大肠杆菌DH5α和BL21、Rosetta感受态细胞的制备和转化 | 第35-36页 |
| 2.2.9 质粒的提取 | 第36页 |
| 2.2.10 琼脂糖凝胶电泳中DNA片段的回收 | 第36-37页 |
| 2.2.11 开花后30天及成熟棉花纤维LR White树脂切片 | 第37页 |
| 2.2.12 载体的构建 | 第37页 |
| 2.2.13 蛋白的诱导及纯化 | 第37-38页 |
| 2.2.14 Western blotting | 第38页 |
| 2.2.15 pull-down验证GhFSN1蛋白和GhE2蛋白的相互作用 | 第38-39页 |
| 三、结果与分析 | 第39-55页 |
| 3.1 GhFSN1转基因棉花鉴定 | 第39-41页 |
| 3.1.1 T2、T3、T4代GhFSN1过表达棉花植株的鉴定 | 第39-40页 |
| 3.1.2 T2、T3代各GhFSN1 RNAi棉花株系鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2 GhFSN1在转基因棉花纤维中的表达分析 | 第41-42页 |
| 3.2.1 棉花纤维RNA提取及逆转录 | 第41页 |
| 3.2.2 T2和T3代转基因棉花纤维中GhFSN1表达量检测 | 第41-42页 |
| 3.3 转基因棉花后代株系的表型分析 | 第42-44页 |
| 3.4 棉花纤维细胞壁厚度分析 | 第44-46页 |
| 3.4.1 GhFSN1过表达转基因棉花T2代株系成熟纤维细胞壁厚度分析 | 第45页 |
| 3.4.2 GhFSN1过表达转基因棉花T3代株系开花后30天纤维细胞壁厚度分析 | 第45-46页 |
| 3.5 GhFSN1转基因株系开花后18天纤维转录组分析及验证 | 第46-51页 |
| 3.5.1 GhFSN1过表达转基因株系开花后18天纤维转录组分析 | 第46-49页 |
| 3.5.2 转录组结果的验证 | 第49-50页 |
| 3.5.3 预测GhFSN1在次生细胞壁和合成中的调控通路 | 第50-51页 |
| 3.6 GhFSN1与GhE2蛋白原核表达及纯化 | 第51-54页 |
| 3.6.1 GhFSN1与GhE2蛋白原核表达载体的构建 | 第51-52页 |
| 3.6.2 GhE2蛋白的原核表达及纯化 | 第52-53页 |
| 3.6.3 GhFSN1蛋白原核表达及纯化 | 第53-54页 |
| 3.7 GhFSN1蛋白与GhE2蛋白的相互作用分析 | 第54-55页 |
| 四、讨论 | 第55-57页 |
| 4.1 GhFSN1参与棉花纤维细胞次生壁合成的调控 | 第55页 |
| 4.2 GhFSN1基因可能与部分棉花基因存在功能冗余 | 第55-56页 |
| 4.3 GhFSN1蛋白可能通过泛素化途径降解 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 附录 | 第64-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
