| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-15页 |
| 1.1 α-酮-β-甲基正戊酸概述 | 第9-10页 |
| 1.1.1 α-酮-β-甲基正戊酸的应用价值 | 第9页 |
| 1.1.2 α-酮-β-甲基正戊酸的合成方法 | 第9-10页 |
| 1.2 L-氨基酸氧化酶和L-氨基酸脱氨酶研究概述 | 第10-12页 |
| 1.2.1 L-氨基酸氧化酶和L-氨基酸脱氨酶的生物活性 | 第10-11页 |
| 1.2.2 L-氨基酸氧化酶和L-氨基酸脱氨酶蛋白晶体结构研究进展 | 第11-12页 |
| 1.3 L-氨基酸脱氨酶的特点 | 第12-13页 |
| 1.3.1 L-氨基酸脱氨酶催化L-氨基酸反应不产生过氧化氢 | 第12页 |
| 1.3.2 多数L-氨基酸脱氨酶定位在细胞膜上 | 第12页 |
| 1.3.3 L-氨基酸脱氨酶可以在大肠杆菌中活性表达 | 第12-13页 |
| 1.4 L-氨基酸脱氨酶活性检测 | 第13页 |
| 1.5 立题依据以及研究意义 | 第13-14页 |
| 1.6 研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-25页 |
| 2.1 材料 | 第15-17页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第15-16页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第16页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第16页 |
| 2.1.4 培养基 | 第16页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第16-17页 |
| 2.2 方法 | 第17-25页 |
| 2.2.1 分子生物学操作 | 第17-18页 |
| 2.2.2 重组菌构建 | 第18页 |
| 2.2.3 菌体培养以及全细胞催化剂制备 | 第18页 |
| 2.2.4 全细胞转化L-异亮氨酸 (L-Ile) 生成 α-酮-β-甲基正戊酸 (KMV) | 第18-19页 |
| 2.2.5 重组大肠杆菌诱导培养条件优化 | 第19-20页 |
| 2.2.6 重组大肠杆菌全细胞转化底物条件优化 | 第20页 |
| 2.2.7 用易错PCR法对目标基因进行随机突变以及突变库的构建 | 第20-21页 |
| 2.2.8 高通量筛选方法 | 第21页 |
| 2.2.9 定点饱和突变 | 第21-23页 |
| 2.2.10 分析方法 | 第23-25页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第25-45页 |
| 3.1 L-氨基酸脱氨酶基因的克隆与表达 | 第25-27页 |
| 3.1.1 L-氨基酸脱氨酶重组菌的构建 | 第25页 |
| 3.1.2 四种L-氨基酸脱氨酶在大肠杆菌中诱导表达并全细胞转化L-Ile | 第25-27页 |
| 3.1.3 L-氨基酸脱氨酶的表达对宿主菌生长的影响 | 第27页 |
| 3.2 重组大肠杆菌全细胞催化剂制备条件优化 | 第27-30页 |
| 3.2.1 最适诱导温度 | 第27-28页 |
| 3.2.2 最适诱导剂添加时刻以及最适诱导时间 | 第28-29页 |
| 3.2.3 最适IPTG浓度 | 第29-30页 |
| 3.2.4 种子液最适培养时间 | 第30页 |
| 3.3 重组大肠杆菌全细胞转化反应条件优化 | 第30-37页 |
| 3.3.1 最适反应p H | 第30-31页 |
| 3.3.2 最适反应温度 | 第31-33页 |
| 3.3.3 最适细胞量 | 第33-36页 |
| 3.3.4 最适底物浓度 | 第36-37页 |
| 3.4 高通量筛选结果以及由正向突变株制备的全细胞催化剂性质 | 第37-41页 |
| 3.4.1 高通量筛选结果 | 第37-38页 |
| 3.4.2 不同底物浓度对突变株全细胞转化效率的影响 | 第38-39页 |
| 3.4.3 不同p H对突变株全细胞转化反应的影响 | 第39-40页 |
| 3.4.4 产物KMV对突变株全细胞转化反应速率的影响 | 第40页 |
| 3.4.5 转化时间对突变株全细胞催化剂活性的影响 | 第40-41页 |
| 3.5 突变株 7/23-6 的氨基酸脱氨酶第209位氨基酸位点饱和突变 | 第41-45页 |
| 3.5.1 第209位氨基酸位点饱和突变后突变子筛选 | 第41-42页 |
| 3.5.2 不同p H对突变株E209Q全细胞转化的影响 | 第42页 |
| 3.5.3 产物KMV对突变株E209Q全细胞转化反应速率的影响 | 第42-43页 |
| 3.5.4 转化时间对突变株E209Q全细胞催化剂活性的影响 | 第43-45页 |
| 主要结论与展望 | 第45-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第53页 |
