| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 文献综述 | 第10-20页 |
| 第一章 细胞分子伴侣Jiv及其与病毒蛋白的作用 | 第10-16页 |
| 1.1 重要的分子伴侣 | 第10-13页 |
| 1.1.1 热休克蛋白 | 第11-13页 |
| 1.2 伴侣分子Jiv | 第13-16页 |
| 1.2.1 Jiv蛋白简介 | 第13页 |
| 1.2.2 HSP40分子 | 第13-14页 |
| 1.2.3 J蛋白及Jiv蛋白的基本结构 | 第14-15页 |
| 1.2.4 Jiv蛋白与瘟病毒属非结构蛋白NS2及其相互作用 | 第15-16页 |
| 第二章 反向遗传技术在病毒感染性克隆构建中的应用 | 第16-20页 |
| 2.1 RNA病毒反向遗传学 | 第16页 |
| 2.2 猪瘟病毒反向遗传系统的建立和发展 | 第16-17页 |
| 2.3 反向遗传系统在猪瘟病毒致病机理研究中的作用 | 第17-20页 |
| 试验研究 | 第20-41页 |
| 第三章 Jiv蛋白对CSFV复制的影响 | 第20-31页 |
| 3.1 材料 | 第20-21页 |
| 3.1.1 细胞、病毒及主要试剂 | 第20-21页 |
| 3.1.2 主要仪器和设备 | 第21页 |
| 3.2 方法 | 第21-26页 |
| 3.2.1 细胞培养与传代 | 第21页 |
| 3.2.2 过表达及干扰载体的构建 | 第21-22页 |
| 3.2.3 干扰重组慢病毒的包装与滴度测定 | 第22-23页 |
| 3.2.4 重组慢病毒感染靶细胞 | 第23页 |
| 3.2.5 猪瘟病毒感染靶细胞及在细胞内的增殖检测 | 第23页 |
| 3.2.6 带Flag或Myc标签重组质粒的构建 | 第23-24页 |
| 3.2.7 免疫共沉淀试验验证NS2蛋白与Jiv分子的相互作用 | 第24页 |
| 3.2.8 RNA提取、cDNA合成及real-time PCR | 第24-25页 |
| 3.2.9 蛋白样的制备及Western blot | 第25-26页 |
| 3.3 结果 | 第26-29页 |
| 3.3.1 构建Jiv基因的过表达载体及慢病毒shRNA干扰载体 | 第26页 |
| 3.3.2 慢病毒感染细胞后对Jiv干扰效果的检测 | 第26-27页 |
| 3.3.3 过表达及干扰掉Jiv分子后对CSFV增殖的影响 | 第27页 |
| 3.3.4 pCDH-CMV-MCS-Jiv504与pcDNA3.1（﹢）-NS2重组质粒的构建 | 第27-28页 |
| 3.3.5 pCDH-CMV-MCS-Jiv504与pcDNA3.1（﹢）-NS2重组质粒在细胞内的表达情况 | 第28-29页 |
| 3.3.6 Co-IP验证NS2蛋白与Jiv分子的相互作用 | 第29页 |
| 3.4 讨论 | 第29-30页 |
| 3.5 小结 | 第30-31页 |
| 第四章 猪瘟病毒C株感染性克隆全长cDNA的构建 | 第31-41页 |
| 4.1 材料 | 第32页 |
| 4.1.1 病毒、细胞和主要试剂 | 第32页 |
| 4.1.2 主要实验仪器 | 第32页 |
| 4.2 方法 | 第32-36页 |
| 4.2.1 酶切位点的选取及感染性克隆构建方案的确定 | 第32-33页 |
| 4.2.2 每个重组质粒的构建过程 | 第33-35页 |
| 4.2.3 感染性克隆重组质粒的提取、线性化处理及纯化 | 第35页 |
| 4.2.4 取线性化全长质粒做模板通过体外转录获取病毒基因组RNA | 第35页 |
| 4.2.5 体外转录的RNA电击转染到ST细胞中 | 第35-36页 |
| 4.2.6 真核启动子感染性克隆重组质粒转染PK15细胞 | 第36页 |
| 4.3 结果 | 第36-39页 |
| 4.3.1 分段引物的设计及各片段的扩增 | 第36-37页 |
| 4.3.2 全基因组的构建及酶切鉴定 | 第37-38页 |
| 4.3.3 重组质粒的提取及线性化处理 | 第38-39页 |
| 4.3.4 体外合成RNA电转细胞及质粒转染细胞并培养后进行PCR检测 | 第39页 |
| 4.4 讨论 | 第39-40页 |
| 4.5 小结 | 第40-41页 |
| 结论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-50页 |
| 附录 | 第50-52页 |
| 致谢 | 第52-54页 |
| 个人简介 | 第54页 |
