| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第8-18页 |
| 1.1 脂肪酶的概述 | 第8-13页 |
| 1.1.1 脂肪酶的来源 | 第8页 |
| 1.1.2 脂肪酶的结构与性质 | 第8-11页 |
| 1.1.3 脂肪酶催化机制 | 第11-12页 |
| 1.1.4 脂肪酶的应用 | 第12-13页 |
| 1.1.5 重组脂肪酶在毕赤酵母中的异源表达 | 第13页 |
| 1.2 耶氏解酯酵母脂肪酶的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.3 微生物酶的分子改造 | 第14-16页 |
| 1.3.1 蛋白质工程概论 | 第15页 |
| 1.3.2 蛋白质工程主要的技术手段 | 第15页 |
| 1.3.3 脂肪酶的蛋白质工程 | 第15-16页 |
| 1.4 本课题的研究内容及意义 | 第16-18页 |
| 1.4.1 本课题的研究目的及意义 | 第16-17页 |
| 1.4.2 本课题的研究内容 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-24页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第18页 |
| 2.1.2 主要仪器和设备 | 第18-19页 |
| 2.1.3 生化试剂及工具酶 | 第19-21页 |
| 2.1.4 主要溶液与培养基 | 第21-23页 |
| 2.1.5 引物 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-39页 |
| 2.2.1 脂肪酶LipY2编码基因的合成 | 第24页 |
| 2.2.2 重组表达载体的构建 | 第24-28页 |
| 2.2.3 毕赤酵母的转化 | 第28-29页 |
| 2.2.4 重组菌株的筛选及摇瓶发酵 | 第29页 |
| 2.2.5 脂肪酶活性的测定 | 第29-31页 |
| 2.2.6 脂肪酶LipY2的分离纯化 | 第31-34页 |
| 2.2.7 脂肪酶LipY2酶学性质的分析及研究 | 第34-35页 |
| 2.2.8 质谱分析 | 第35页 |
| 2.2.9 序列比对 | 第35页 |
| 2.2.10 lipY2基因定点突变 | 第35-38页 |
| 2.2.11 突变体重组表达载体的构建 | 第38页 |
| 2.2.12 LipY2突变体的表达及纯化 | 第38页 |
| 2.2.13 LipY2及其突变体酶学性质的分析与比较 | 第38-39页 |
| 3 结果与讨论 | 第39-63页 |
| 3.1 脂肪酶基因lipY2在毕赤酵母GS115中的高效异源表达 | 第39-49页 |
| 3.1.1 脂肪酶基因lipY2的获得 | 第39页 |
| 3.1.2 重组表达载体pPIC9K-lipY2的构建 | 第39-40页 |
| 3.1.3 lipY2在P.pastoris GS115中的表达及筛选 | 第40-42页 |
| 3.1.4 脂肪酶LipY2的诱导培养及酶活测定 | 第42-43页 |
| 3.1.5 脂肪酶LipY2的分离纯化 | 第43-45页 |
| 3.1.6 重组脂肪酶LipY2酶学性质的研究 | 第45-49页 |
| 3.2 脂肪酶LipY2抗胰蛋白酶特性的改造 | 第49-63页 |
| 3.2.1 脂肪酶LipY2的三维结构 | 第49页 |
| 3.2.2 脂肪酶LipY2突变点的确定 | 第49-53页 |
| 3.2.3 突变体酵母表达载体的构建 | 第53-56页 |
| 3.2.4 突变体在毕赤酵母中的表达与纯化 | 第56-57页 |
| 3.2.5 脂肪酶LipY2与其突变体酶学性质的分析及比较 | 第57-63页 |
| 4 结论 | 第63-64页 |
| 5 展望 | 第64-65页 |
| 6 参考文献 | 第65-71页 |
| 7 攻读硕士期间发表的论文 | 第71-72页 |
| 8 致谢 | 第72页 |
