符号说明 | 第1-9页 |
中文摘要 | 第9-10页 |
英文摘要 | 第10-12页 |
1 前言 | 第12-19页 |
·产气荚膜梭菌介绍 | 第12-13页 |
·产气荚膜梭菌主要毒素的介绍 | 第13-18页 |
·α毒素 | 第13-14页 |
·β毒素 | 第14-16页 |
·β1 毒素 | 第14-16页 |
·β2 毒素 | 第16页 |
·ε 毒素 | 第16-17页 |
·ι 毒素 | 第17-18页 |
·本课题的研究目的及意义 | 第18-19页 |
2 材料与方法 | 第19-34页 |
·材料 | 第19-22页 |
·主要的试剂及溶液的配制 | 第19-21页 |
·主要试验仪器 | 第21页 |
·菌株材料和实验动物 | 第21-22页 |
·β毒素的制备 | 第22页 |
·重组β毒素表达载体的验证 | 第22页 |
·β毒素基因的原核表达 | 第22页 |
·β毒素的纯化 | 第22-24页 |
·β毒素的SDS-PAGE分析 | 第24-25页 |
·重组β毒素蛋白的鉴定 | 第25-26页 |
·BALB/c小鼠的免疫 | 第26-27页 |
·间接ELISA法检测免疫后小鼠血清的抗体效价 | 第27-28页 |
·杂交瘤细胞株的建立 | 第28-29页 |
·骨髓瘤细胞(Sp2/0)的准备 | 第28页 |
·脾细胞的准备 | 第28页 |
·准备饲养细胞 | 第28页 |
·细胞的融合 | 第28页 |
·杂交瘤细胞的筛选 | 第28页 |
·杂交瘤细胞克隆化培养 | 第28-29页 |
·杂交瘤细胞扩大培养及冻存 | 第29页 |
·杂交瘤细胞株分泌单克隆抗体稳定性的测定 | 第29页 |
·单克隆抗体的亚类鉴定 | 第29页 |
·单克隆抗体腹水制备 | 第29页 |
·单克隆抗体的纯化 | 第29-30页 |
·单克隆抗体的特性鉴定 | 第30-34页 |
·腹水中单克隆抗体效价的测定 | 第30-31页 |
·单抗特异性的验证 | 第31页 |
·单克隆抗体反应原性测定 | 第31-34页 |
3.结果和分析 | 第34-41页 |
·β毒素的制备 | 第34页 |
·重组β毒素表达载体的验证 | 第34页 |
·β毒素基因的原核表达 | 第34页 |
·提纯后的β毒素的SDS-PAGE电泳分析及蛋白浓度的测定 | 第34-35页 |
·β毒素蛋白的验证 | 第35-36页 |
·免疫后小鼠血清中抗体效价检测结果 | 第36页 |
·杂交瘤细胞株的建立 | 第36页 |
·杂交瘤细胞株分泌单克隆抗体稳定性测定 | 第36-37页 |
·单克隆抗体亚类鉴定 | 第37页 |
·单克隆抗体的纯化及浓度测定 | 第37-38页 |
·单克隆抗体的特性鉴定 | 第38-41页 |
·腹水中单抗体效价的测定 | 第38页 |
·单克隆抗体特异性鉴定 | 第38-39页 |
·Western Blot实验结果 | 第39-41页 |
·单克隆抗体与重组β毒素的反应性 | 第39-40页 |
·单克隆抗体与天然粗提β毒素的反应性 | 第40-41页 |
4.讨论 | 第41-43页 |
·β毒素的原核表达 | 第41页 |
·β毒素单克隆抗体的制备和鉴定 | 第41-42页 |
·单克隆抗体的纯化方法 | 第42-43页 |
5 结论 | 第43-44页 |
参考文献 | 第44-49页 |
致谢 | 第49-50页 |
攻读学位期间发表论文情况 | 第50页 |