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中国旧大陆猴TRIMCyp基因型检测及EGFP标记的HIV-1假病毒构建

摘要第1-11页
Abstract第11-13页
1 引言第13-27页
   ·艾滋病及其流行现状第13页
   ·HIV 研究概述第13-18页
     ·HIV 的发现第13-14页
     ·HIV 的分子生物学特征第14-15页
     ·HIV 的生活周期和致病机制第15-16页
     ·HIV-1 感染受体及其细胞亲嗜性第16页
     ·HIV 起源第16-17页
     ·HIV-1 假病毒感染系统第17-18页
   ·艾滋病动物感染模型的研究进展第18-20页
     ·鼠模型第18-19页
     ·黑猩猩与长臂猿第19页
     ·猴模型第19页
     ·SHIV 动物感染模型第19-20页
   ·TRIM5α研究进展概述第20-26页
     ·TRIM5α的发现过程第20-21页
     ·TRIM5α与TRIM 蛋白家族第21-23页
     ·TRIM5α限制HIV-1 感染的机理第23-25页
     ·TRIMCyp第25-26页
   ·本研究的目的与意义第26-27页
2 材料和方法第27-41页
   ·试验所用菌种及细胞第27页
   ·试验所用猴血样本来源第27页
   ·试验所用质粒第27-29页
   ·引物设计与测序第29-30页
   ·主要试剂与工具酶第30-31页
     ·主要酶类与生化制剂第30页
     ·主要试剂的配制第30-31页
   ·本论文中所使用的试剂盒第31页
   ·主要仪器与设备第31-32页
   ·PCR 方法筛选中国TRIMCyp 基因型旧大陆猴第32-33页
     ·血液DNA 的小量提取第32页
     ·以血液DNA 为模板进行PCR 检测第32-33页
   ·RT-PCR 方法筛选TRIMCyp 基因型旧大陆猴第33-34页
     ·血液RNA 的小量提取第33页
     ·cDNA 合成第33-34页
     ·以cDNA 为模板进行PCR 检测第34页
   ·TRIM5 及TRIMCyp cDNA 的克隆与序列分析第34-36页
     ·TRIM5 及TRIMCyp 全cDNA 的扩增第34页
     ·凝胶回收目的DNA 片段第34-35页
     ·目的片段与克隆载体的连接第35页
     ·感受态细胞制备(TSS 一步法)第35页
     ·连接产物的转化第35页
     ·重组子的筛选与鉴定第35-36页
     ·阳性重组质粒测序与分析第36页
   ·中国恒河猴TRIM5 基因组序列分析第36-38页
     ·目的片段的扩增第36页
     ·目的片段的克隆第36-37页
     ·阳性质粒测序与序列分析第37-38页
   ·重组表达载体构建与鉴定第38-39页
     ·目的片段的扩增第38页
     ·目的片段与载体的连接第38页
     ·重组表达载体的鉴定与测序第38-39页
     ·目的基因在293T 细胞上的瞬时表达第39页
   ·HIV 伪病毒的构建与鉴定第39-41页
     ·EGFP 标记的HIV 伪病毒的构建第39页
     ·假病毒包装第39-40页
     ·假病毒反转录酶活性检活性检测第40-41页
3 结果第41-53页
   ·中国旧大陆猴的TRIMCyp 的DNA 检测第41-43页
     ·DNA 检测引物的设计第41页
     ·广州与四川恒河猴的DNA 检测第41页
     ·四川地区藏酋猴的DNA 检测第41页
     ·广州食蟹猴与云南恒河猴的检测第41-43页
   ·中国部分旧大陆猴的RNA 检测第43-45页
     ·部分旧大陆猴的RNA 检测第43-44页
     ·TRIM5 与TRIMCyp cDNA 的克隆与序列分析第44-45页
   ·旧大陆猴TRIMCyp 基因的转录状态第45-46页
   ·中国未突变恒河猴TRIM5 DNA 分析第46-49页
     ·各目的片段的克隆与鉴定第47-49页
   ·重组真核表达载体的构建与表达第49-50页
   ·HIV-1 伪病毒的构建与鉴定第50-53页
     ·EGFP 标记的HIV-1 伪病毒的鉴定第50-51页
     ·HIV-1 伪病毒的活性检测第51-53页
4 讨论第53-56页
   ·HIV-1 易感旧大陆猴筛选第53页
   ·几种 TRIM5α 和 TRIMCyp 蛋白的表达第53-54页
   ·对 TRIM5α 和 TRIMCyp 的测序分析第54页
   ·HIV 假病毒的构建与意义第54-56页
5 结论第56-57页
致谢第57-58页
参考文献第58-67页
附录第67-68页
攻读硕士学位期间发表的学术论文第68页

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