| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 1 引言 | 第13-21页 |
| ·癌症 | 第13页 |
| ·溶瘤病毒的研究现状及进展 | 第13-14页 |
| ·新城疫病毒 | 第14-17页 |
| ·NDV 的结构和功能蛋白 | 第14-15页 |
| ·NDV 的生命周期 | 第15-16页 |
| ·NDV 毒株的分类 | 第16-17页 |
| ·NDV 应用于肿瘤治疗 | 第17-18页 |
| ·新城疫病毒的抗肿瘤历史 | 第17页 |
| ·NDV 治疗肿瘤的机理 | 第17-18页 |
| ·负链RNA 病毒反向遗传操作技术的研究与应用 | 第18-19页 |
| ·利用反向遗传操作技术重组NDV 应用于肿瘤治疗 | 第19-20页 |
| ·研究的目的与意义 | 第20-21页 |
| 2 材料 | 第21-23页 |
| ·细胞株和质粒 | 第21页 |
| ·培养基及生化试剂 | 第21页 |
| ·鸡胚 | 第21页 |
| ·实验动物 | 第21页 |
| ·克隆EGFP 引物 | 第21页 |
| ·主要仪器和设备 | 第21-23页 |
| 3 方法 | 第23-32页 |
| ·绿色荧光蛋白基因克隆与序列分析 | 第23-24页 |
| ·增强型绿色荧光蛋白EGFP 基因的PCR 扩增 | 第23页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第23页 |
| ·EGFP 基因的序列测定 | 第23-24页 |
| ·表达EGFP 重组病毒基因组全长cDNA 的构建 | 第24-26页 |
| ·EGFP 片段的制备 | 第24-25页 |
| ·重组NDV 病毒基因组转录载体片段的制备 | 第25-26页 |
| ·EGFP 胶回收产物与重组NDV 病毒基因组转录载体片段连接 | 第26页 |
| ·阳性重组质粒的鉴定 | 第26页 |
| ·细胞培养 | 第26-27页 |
| ·细胞复苏 | 第26-27页 |
| ·细胞传代 | 第27页 |
| ·细胞冻存 | 第27页 |
| ·NDV-rAnh/EGFP 拯救及鉴定 | 第27-29页 |
| ·NDV-rAnh/EGFP 拯救 | 第27-28页 |
| ·NDV-rAnh/EGFP 滴度测定 | 第28页 |
| ·重组病毒EGFP 稳定表达检测 | 第28页 |
| ·NDV-rAnh/EGFP 增殖能力测定 | 第28-29页 |
| ·EGFP 在感染重组病毒的肿瘤细胞中表达的鉴定 | 第29页 |
| ·MTT 法测定NDV- rAnh/EGFP 对肿瘤细胞的抑制作用 | 第29页 |
| ·昆明小鼠H22 肿瘤模型的建立 | 第29-30页 |
| ·昆明小鼠的饲养 | 第29页 |
| ·昆明小鼠H22 腹水瘤模型的建立 | 第29-30页 |
| ·H22 皮下移植瘤模型的建立 | 第30页 |
| ·昆明小鼠H22 肿瘤模型的分组与治疗 | 第30页 |
| ·H22 腹水瘤荷瘤小鼠的分组与治疗 | 第30页 |
| ·H22 皮下移植瘤模型的分组与治疗 | 第30页 |
| ·重组新城疫病毒毒理及安全性实验 | 第30-32页 |
| ·荷瘤小鼠体内活病毒的检测 | 第30页 |
| ·急性毒性试验 | 第30-31页 |
| ·亚急性毒性试验 | 第31-32页 |
| 4 实验结果 | 第32-43页 |
| ·EGFP 基因的克隆 | 第32-33页 |
| ·EGFP 基因的PCR 扩增 | 第32页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第32-33页 |
| ·EGFP 基因的序列测定 | 第33页 |
| ·重组NDV rAnh/EGFP 基因组载体的构建 | 第33-34页 |
| ·EGFP 片段的制备 | 第33页 |
| ·NDV Anh 基因组载体的制备 | 第33-34页 |
| ·pFLC-rAnh/EGFP 阳性重组质粒的鉴定 | 第34页 |
| ·重组NDV-rAnh/EGFP 的拯救及活性测定 | 第34-36页 |
| ·重组NDV-rAnh/EGFP 的拯救 | 第34-35页 |
| ·NDV-rAnh/EGFP 株滴度的测定 | 第35页 |
| ·重组病毒EGFP 稳定表达检测 | 第35-36页 |
| ·NDV-rAnh/EGFP 增殖能力测定 | 第36页 |
| ·EGFP 在感染重组病毒的肿瘤细胞中表达的鉴定 | 第36-37页 |
| ·MTT 法测定NDV-rAnh/EGFP 对肿瘤细胞的抑制作用 | 第37-39页 |
| ·MTT 法测定NDV-rAnh/EGFP 对HepG-2 细胞的抑制作用 | 第37-38页 |
| ·MTT 法测定NDV-rAnh/EGFP 对U251 细胞的抑制作用 | 第38页 |
| ·MTT 法测定NDV-rAnh/EGFP 对HeLa 细胞的抑制作用 | 第38页 |
| ·MTT 法测定NDV-rAnh/EGFP 对SH-SY5Y 细胞的抑制作用 | 第38-39页 |
| ·MTT 法测定NDV-rAnh/EGFP 对A549 细胞的抑制作用 | 第39页 |
| ·昆明小鼠H22 肝癌动物模型建立 | 第39-40页 |
| ·NDV-rAnh/EGFP 体内试验对昆明小鼠H22 肝癌的抑制作用 | 第40-42页 |
| ·NDV-rAnh/EGFP 对H22 腹水瘤的抑制 | 第40页 |
| ·NDV-rAnh/EGFP 对H22 实体瘤的抑制 | 第40-42页 |
| ·重组新城疫病毒毒理及安全性实验 | 第42-43页 |
| 5 讨论 | 第43-47页 |
| ·新城疫病毒反向遗传操作系统的建立 | 第43页 |
| ·NDV 毒株的选择 | 第43页 |
| ·外源基因插入位置的选择 | 第43-44页 |
| ·NDV-rAnh/EGFP 的构建及拯救 | 第44页 |
| ·NDV-rAnh/EGFP 的鉴定 | 第44页 |
| ·NDV-rAnh/EGFP 的病毒增殖能力 | 第44页 |
| ·重组NDV-rAnh/EGFP 株对癌细胞的抑制作用 | 第44-45页 |
| ·昆明小鼠H22 肝癌动物模型建立 | 第45-46页 |
| ·重组新城疫病毒毒理及安全性实验 | 第46-47页 |
| 6 结论 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 附录A | 第54-56页 |
| 附录B | 第56-57页 |
| 附录C | 第57-59页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第59页 |
