| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 1 前言 | 第8-19页 |
| ·新型隐球酵母的概述 | 第8-10页 |
| ·新型隐球酵母的分类和分布 | 第8页 |
| ·新型隐球菌致病途径 | 第8-10页 |
| ·新型隐球酵母致病因子 | 第10-13页 |
| ·荚膜 | 第10-11页 |
| ·具有37℃条件下的生存能力 | 第11-12页 |
| ·漆酶 | 第12页 |
| ·抗饥饿反应因子 | 第12-13页 |
| ·饥饿反应信号通路 | 第13-15页 |
| ·细胞对营养饥饿的感应和应答 | 第13-14页 |
| ·TOR信号转导途径 | 第14页 |
| ·新型隐球酵母的氮源饥饿 | 第14-15页 |
| ·数字基因表达谱 | 第15-16页 |
| ·乙酰转移酶基因(ACT)和异柠檬酸裂合酶基因(ICL) | 第16-17页 |
| ·验证基因功能的策略 | 第17页 |
| ·本论文的研究内容及意义 | 第17-19页 |
| ·研究内容 | 第17-18页 |
| ·研究意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-41页 |
| ·材料 | 第19-27页 |
| ·菌种与质粒 | 第19页 |
| ·工具酶及相关试剂 | 第19-22页 |
| ·主要仪器和设备 | 第22-23页 |
| ·引物 | 第23-24页 |
| ·培养基及培养条件 | 第24-25页 |
| ·主要溶液 | 第25-27页 |
| ·方法 | 第27-41页 |
| ·ACT、ICL在vps41△中恢复表达 | 第27页 |
| ·vps41△：：ACT、vps41△：：ICL菌株中ACT、ICL的表达水平分析 | 第27-29页 |
| ·敲除载体pKH-ACT和pKH-ICL的构建 | 第29-34页 |
| ·电转化法分别敲除WT菌株的ACT和ICL | 第34-37页 |
| ·回补载体pKU-ACT和pKU-ICL的构建 | 第37-38页 |
| ·5-氟乳清酸对敲除突变株的诱导 | 第38页 |
| ·电转化法回补act△和icl△ | 第38-39页 |
| ·敲除突变株与回补菌株的抗饥饿能力的检测 | 第39页 |
| ·荧光定量PCR分别检测ACT和ICL的表达水平 | 第39-40页 |
| ·待测菌株在小鼠(BALB/c)模型中致病能力的检测 | 第40-41页 |
| 3 结果与讨论 | 第41-61页 |
| ·组成型表达ACT、ICL对vps41△抗饥饿能力的影响 | 第41页 |
| ·荧光定量PCR分别检测ACT、ICL的表达水平 | 第41-43页 |
| ·TRIZOL试剂法提取RNA | 第42-43页 |
| ·荧光定量PCR验证 | 第43页 |
| ·敲除载体pKH-ACT和pKH-ICL的构建 | 第43-46页 |
| ·PCR扩增敲除载体的左臂、右臂 | 第43-44页 |
| ·HYG片段和载体骨架pBlue KS的酶切 | 第44-45页 |
| ·敲除载体的构建 | 第45-46页 |
| ·敲除突变株的筛选与验证 | 第46-48页 |
| ·敲除突变株的筛选 | 第46-47页 |
| ·敲除突变株的验证 | 第47-48页 |
| ·回补载体pKU-ACT和pKU-ICL的构建 | 第48-51页 |
| ·URA5及载体骨架的获取 | 第49页 |
| ·回补载体的构建 | 第49-51页 |
| ·回补菌株的筛选与鉴定 | 第51-53页 |
| ·5-氟乳清酸对敲除突变株的诱导 | 第51-52页 |
| ·回补菌株的筛选与验证 | 第52-53页 |
| ·待测菌株抗饥饿能力的检测 | 第53-55页 |
| ·突变株和回补突变株的基因表达水平分析 | 第55-57页 |
| ·TRIZOL试剂法提取RNA | 第55-56页 |
| ·act△和act△：：ACT中ACT基因的表达水平分析 | 第56页 |
| ·icl△和icl△：：ICL中ICL基因的表达水平分析 | 第56-57页 |
| ·探索ACT、ICL与VPS41之间的联系 | 第57-59页 |
| ·检测经饥饿诱导后vps41△和vps41△：：VPS41中ACT基因的表达水平 | 第57-58页 |
| ·检测经饥饿诱导后vps41△和vps41△：：VPS41中ICL基因的表达水平 | 第58-59页 |
| ·待测菌株在小鼠(BALB/c)模型中致病能力的检测 | 第59-61页 |
| 4 结论 | 第61-62页 |
| 5 展望 | 第62-63页 |
| 6 参考文献 | 第63-69页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第69-70页 |
| 8 致谢 | 第70页 |
