| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-15页 |
| ·结合疫苗概述 | 第9-11页 |
| ·结合疫苗产生 | 第9-10页 |
| ·结合疫苗的免疫机制 | 第10页 |
| ·结合疫苗的前景及存在问题 | 第10-11页 |
| ·结合疫苗中的常用载体 | 第11-12页 |
| ·结合疫苗中的常用载体概况 | 第11页 |
| ·结合疫苗中的常用载体分类 | 第11-12页 |
| ·CRM197蛋白作为蛋白载体在结合疫苗中的应用 | 第12-13页 |
| ·CRM197蛋白的分子生物学基础 | 第12页 |
| ·CRM197蛋白的应用及生产工艺开发 | 第12-13页 |
| ·本课题的研究目的、意义和主要内容 | 第13-15页 |
| ·本论文研究的目的和意义 | 第13-14页 |
| ·本论文研究的主要内容 | 第14-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-39页 |
| ·实验材料 | 第15-22页 |
| ·菌种及质粒 | 第15页 |
| ·主要实验仪器 | 第15-16页 |
| ·工具酶及相关试剂 | 第16-17页 |
| ·培养基的配制及培养条件 | 第17-19页 |
| ·主要溶液 | 第19-22页 |
| ·主要分析方法 | 第22-25页 |
| ·核酸电泳方法 | 第22页 |
| ·DNA胶回收过程 | 第22页 |
| ·质粒小提试剂盒提取细菌质粒 | 第22-23页 |
| ·常规DNA PCR | 第23页 |
| ·常用SDS-PAGE配制方法 | 第23-25页 |
| ·Western Blot免疫印迹 | 第25页 |
| ·层析柱装柱处理 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-39页 |
| ·表达CRM197蛋白的基因工程菌株构建 | 第25-31页 |
| ·表达CRM197蛋白的基因工程菌株摇瓶水平上蛋白表达 | 第31-33页 |
| ·表达CRM197蛋白的基因工程菌株2L发酵罐水平上蛋白表达 | 第33页 |
| ·表达CRM197蛋白的基因工程菌株的发酵工艺 | 第33-35页 |
| ·CRM197蛋白的纯化工艺 | 第35-38页 |
| ·Western Blot对纯化后的CRM197蛋白定性研究 | 第38-39页 |
| 3 结果与讨论 | 第39-55页 |
| ·表达CRM197蛋白的基因工程菌株构建 | 第39-43页 |
| ·表达CRM197蛋白的表达质粒的构建 | 第39-42页 |
| ·质粒pCKM5.1的电转化、质粒的接合转移 | 第42-43页 |
| ·质粒pCKM5.1中表达CRM197基因片段测序 | 第43页 |
| ·质粒pCKM5.1稳定性检测 | 第43页 |
| ·表达CRM197蛋白的基因工程菌株发酵工艺的摸索 | 第43-47页 |
| ·表达CRM197蛋白的基因工程菌株在摇瓶水平上蛋白表达量的鉴定 | 第43-44页 |
| ·表达CRM197蛋白的基因工程菌株在2L发酵罐水平上蛋白表达量的鉴定 | 第44-45页 |
| ·不同浓度Fe~(3+)对表达CRM197蛋白的基因工程菌株生长的影响 | 第45-46页 |
| ·氨基酸储液流加补料对表达CRM197蛋白基因工程菌株生长的影响 | 第46-47页 |
| ·CRM197蛋白纯化工艺的研究 | 第47-54页 |
| ·硫酸铵沉淀法粗纯CRM197蛋白不同浓度的选择 | 第47-48页 |
| ·Q SFF层析纯化工艺的摸索 | 第48-49页 |
| ·柱层析色谱法纯化CRM197蛋白不同填料的选择 | 第49-51页 |
| ·DEAE柱层析色谱法纯化CRM197蛋白条件优化 | 第51-52页 |
| ·CRM197蛋白纯化工艺总结 | 第52-54页 |
| ·表达CRM197蛋白的基因工程菌株发酵纯化后产物性质检测 | 第54-55页 |
| ·表达CRM197基因工程菌株的纯化产物Western Blot的定性研究 | 第54-55页 |
| 4 结论 | 第55-56页 |
| 5 展望 | 第56-57页 |
| 6 参考文献 | 第57-64页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第64-65页 |
| 8 致谢 | 第65-67页 |
| 附录 | 第67-74页 |
