| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 专业词汇中英文对照表 | 第10-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-43页 |
| ·ATM技术及其进展 | 第19-32页 |
| ·ATM技术简介 | 第19页 |
| ·ATM技术的发展历史 | 第19-21页 |
| ·ATM技术产生的免疫测定技术背景 | 第19-20页 |
| ·ELISA技术的兴起 | 第19页 |
| ·非竞争夹心法ELISA的广泛应用 | 第19-20页 |
| ·ATM测定方法的诞生 | 第20-21页 |
| ·微型化免疫测定方式的提出 | 第20页 |
| ·微型化免疫测定理论的提出 | 第20-21页 |
| ·ATM测定方法的初步尝试 | 第21页 |
| ·ATM技术的构成要素 | 第21-22页 |
| ·不同检测通道的独立性 | 第21页 |
| ·平行高通量检测 | 第21-22页 |
| ·与常规ELISA相当或更高的检测灵敏性和动态范围 | 第22页 |
| ·ATM技术的发展概况 | 第22-28页 |
| ·微型免疫测定的结合动力学理论研究 | 第22-23页 |
| ·点样技术对ATM测定的影响 | 第23-24页 |
| ·固定化技术平台 | 第24-26页 |
| ·平面固相介质平台 | 第24-25页 |
| ·微球/磁珠悬浮测定平台 | 第25页 |
| ·微流体检测平台 | 第25-26页 |
| ·ATM的检测 | 第26-27页 |
| ·检测手段和方法 | 第26页 |
| ·检测策略 | 第26-27页 |
| ·信号放大反应 | 第27页 |
| ·数据分析 | 第27-28页 |
| ·ATM技术在肿瘤相关标志物检测方面的应用 | 第28-32页 |
| ·肿瘤相关标志物的研究背景 | 第28-29页 |
| ·ATM技术在肿瘤相关标志物检测方面的进展 | 第29-32页 |
| ·乳腺癌 | 第30页 |
| ·肺癌 | 第30页 |
| ·结直肠癌 | 第30-31页 |
| ·胃癌 | 第31-32页 |
| ·针对胃癌相关新型标志物的联合定量检测技术的建立 | 第32-43页 |
| ·胃癌相关标志物的研究现状 | 第32-33页 |
| ·胃癌相关标志物研究存在的问题和不足 | 第33-34页 |
| ·常规标志物的临床检测表现有限 | 第33页 |
| ·组织特异性标志物的肿瘤相关性不足 | 第33页 |
| ·标志物类型单一 | 第33-34页 |
| ·联合检测策略和技术相对滞后 | 第34页 |
| ·Array-ELISA技术在胃癌相关标志物联合定量研究中的优势 | 第34-35页 |
| ·基于胃癌相关新型标志物建立Array-ELISA技术的问题和挑战 | 第35-43页 |
| ·新型标志物的相关生物资源有限 | 第35-37页 |
| ·标志物蛋白 | 第35-36页 |
| ·标志物抗体 | 第36-37页 |
| ·配对抗体的筛选成功率低 | 第37-38页 |
| ·生物资源的限制 | 第37页 |
| ·抗体配对的理论限制 | 第37页 |
| ·高背景现象的干扰 | 第37-38页 |
| ·联合定量测定的严格要求 | 第38-43页 |
| ·可靠性 | 第38-39页 |
| ·特异性 | 第39-40页 |
| ·准确性 | 第40页 |
| ·加标回收率 | 第40页 |
| ·定量检测极限 | 第40-41页 |
| ·标准曲线的拟合 | 第41-43页 |
| 第二章 候选标志物相关蛋白和抗体的制备 | 第43-67页 |
| ·引言 | 第43页 |
| ·材料和方法 | 第43-58页 |
| ·材料 | 第43-48页 |
| ·克隆表达载体 | 第43页 |
| ·大肠杆菌表达和克隆菌株 | 第43-44页 |
| ·柱料 | 第44页 |
| ·实验动物和细胞培养 | 第44页 |
| ·分子生物学试剂 | 第44页 |
| ·抗体制备和筛选相关试剂 | 第44页 |
| ·软件和数据库 | 第44页 |
| ·缓冲液 | 第44-45页 |
| ·仪器 | 第45-46页 |
| ·其它试剂或耗材 | 第46页 |
| ·引物合成 | 第46-48页 |
| ·方法 | 第48-58页 |
| ·抗原表位预测 | 第48页 |
| ·PCR | 第48-49页 |
| ·限制性内切酶双酶切反应 | 第49页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第49页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶回收 | 第49-50页 |
| ·DNA片段与质粒的连接 | 第50页 |
| ·细菌转化 | 第50页 |
| ·质粒提取 | 第50-51页 |
| ·原核重组表达载体的构建流程 | 第51页 |
| ·重组蛋白的小量诱导表达 | 第51页 |
| ·十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第51-52页 |
| ·考马斯亮蓝染色 | 第52页 |
| ·重组蛋白表达的可溶性分析 | 第52页 |
| ·重组蛋白的镍柱亲和纯化 | 第52-53页 |
| ·重组蛋白的复性 | 第53-54页 |
| ·基于去污剂sarkosine的纯化复性方法 | 第53页 |
| ·基于包涵体富集的复性方法 | 第53-54页 |
| ·兔源pAb的制备 | 第54页 |
| ·鼠源mAb的制备 | 第54页 |
| ·mAb的大量制备 | 第54-55页 |
| ·动物体内诱生法 | 第54页 |
| ·体外培养法 | 第54-55页 |
| ·抗体的亲和蛋白纯化 | 第55页 |
| ·直接法ELISA | 第55页 |
| ·间接法ELISA | 第55页 |
| ·Bradford蛋白定量测定 | 第55-56页 |
| ·免疫印迹测定 | 第56页 |
| ·点印迹测定 | 第56-57页 |
| ·免疫荧光测定 | 第57页 |
| ·免疫沉淀测定 | 第57页 |
| ·免疫组织化学测定 | 第57-58页 |
| ·实验结果 | 第58-66页 |
| ·基于前期实验基础和文献检索的候选标志物选择 | 第58-60页 |
| ·标志物原核重组蛋白的大规模制备 | 第60-64页 |
| ·标志物抗体的大规模制备和严格筛选 | 第64页 |
| ·Nus标签重组质粒具有较好的表达率和蛋白可溶性 | 第64页 |
| ·抗体制备对抗体质量的影响 | 第64-66页 |
| ·小结 | 第66-67页 |
| 第三章 抗体夹心配对筛选 | 第67-83页 |
| ·引言 | 第67页 |
| ·材料和方法 | 第67-69页 |
| ·材料 | 第67页 |
| ·缓冲液 | 第67-68页 |
| ·方法 | 第68-69页 |
| ·蛋白的透析 | 第68页 |
| ·蛋白的浓缩 | 第68页 |
| ·生物素标记 | 第68页 |
| ·重组蛋白与柱料的共价偶联 | 第68-69页 |
| ·抗体的抗原亲和层析纯化 | 第69页 |
| ·夹心法ELISA | 第69页 |
| ·实验结果 | 第69-82页 |
| ·基于多种配对方式的抗体配对筛选 | 第69-70页 |
| ·生物素标记效率优化 | 第70-71页 |
| ·抗体配对筛选相关的高背景干扰现象的研究 | 第71-80页 |
| ·抗原空白对照高背景现象的出现 | 第71-72页 |
| ·基于酶标二抗检测的非特异性结合研究 | 第72-75页 |
| ·抗体的亲和蛋白纯化过程对背景信号的影响 | 第72-73页 |
| ·酶标二抗的跨物种交叉反应对背景信号的影响 | 第73-74页 |
| ·高背景与抗体的腹水制备过程相关 | 第74-75页 |
| ·基于生物素-链亲和素检测系统的非特异性结合研究 | 第75-77页 |
| ·捕获mAb与检测mAb之间存在高背景 | 第75-76页 |
| ·高背景与抗体来源的HA有关 | 第76-77页 |
| ·抗体相关的HA来自腹水 | 第77页 |
| ·高背景的降低和消除 | 第77-79页 |
| ·不同封闭条件对高背景的影响 | 第77-78页 |
| ·抗原亲和层析可有效消除抗体的HA污染 | 第78-79页 |
| ·高背景消除对免疫测定效果的改善 | 第79-80页 |
| ·抗原亲和层析的洗脱优化 | 第80-82页 |
| ·小结 | 第82-83页 |
| 第四章 Array-ELISA技术的建立及其在血清筛选中的初步应用 | 第83-107页 |
| ·引言 | 第83页 |
| ·材料和方法 | 第83-87页 |
| ·材料 | 第83-86页 |
| ·商品购置的抗原和抗体 | 第83-84页 |
| ·试剂和耗材 | 第84页 |
| ·仪器 | 第84页 |
| ·软件 | 第84页 |
| ·血清样本 | 第84-86页 |
| ·方法 | 第86-87页 |
| ·血清样本的收集、保存和规范 | 第86页 |
| ·ATM的设计和制作 | 第86-87页 |
| ·Array-ELISA反应 | 第87页 |
| ·数据转化和分析 | 第87页 |
| ·实验结果 | 第87-105页 |
| ·基于单一抗体对的Array-ELISA反应方式的建立和优化 | 第87-94页 |
| ·点样均一性检测 | 第88页 |
| ·点样浓度对检测效果的影响 | 第88-89页 |
| ·曝光时间对检测效果的影响 | 第89页 |
| ·点样缓冲液对检测效果的影响 | 第89-92页 |
| ·本底高背景的出现和消除 | 第92-94页 |
| ·封闭剂和去污剂的使用效果评价 | 第92-93页 |
| ·重组蛋白复性对本底高背景的改善 | 第93-94页 |
| ·基于多种抗体对的Array-ELISA反应方式的建立和优化 | 第94-95页 |
| ·不同抗原-抗体之间交叉反应的影响 | 第94-95页 |
| ·不同抗体与抗体之间交叉反应的影响 | 第95页 |
| ·针对多种标志物的Array-ELISA技术的建立和评价 | 第95-98页 |
| ·基于标准蛋白的标准曲线的建立 | 第95-97页 |
| ·检测信号独立性验证 | 第97-98页 |
| ·加标回收实验 | 第98页 |
| ·血清样本的定性筛查 | 第98-101页 |
| ·针对6种标志物的Array-ELISA联合定性筛查 | 第98-99页 |
| ·多种显著性差异标志物的相关性分析 | 第99页 |
| ·联合检测模型的构建 | 第99-100页 |
| ·联合检测模型的判别 | 第100-101页 |
| ·血清样本的定量筛查 | 第101-105页 |
| ·针对5种标志物的Array-ELISA联合定量筛查 | 第101-104页 |
| ·5 种标志物的相关性分析 | 第104-105页 |
| ·联合检测模型的构建 | 第105页 |
| ·小结 | 第105-107页 |
| 第五章 讨论 | 第107-115页 |
| ·重组蛋白制备对Array-ELISA技术构建的影响 | 第108页 |
| ·抗体制备对Array-ELISA技术构建的影响 | 第108-110页 |
| ·自主构建Array-ELISA测定方法的多种技术优化和评价 | 第110-112页 |
| ·胃癌相关候选标志物血清检测能力的初步挖掘 | 第112-115页 |
| 结论 | 第115-117页 |
| 参考文献 | 第117-131页 |
| 作者简介及在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第131页 |
