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猪细环病毒与猪圆环病毒2型分子生物学特性研究

摘要第1-8页
Abstract第8-15页
英文缩略表第15-16页
第一章 引言第16-31页
   ·猪细环病毒第16-21页
     ·病原学第16-17页
     ·流行病学第17-19页
     ·病毒培养第19页
     ·感染性分子克隆第19页
     ·TTSuVs 分子生物学第19页
     ·TTSuVs 的遗传变异第19-20页
     ·TTSuV 病原学诊断方法第20-21页
     ·血清学诊断方法第21页
   ·猪圆环病毒 2 型第21-29页
     ·概况第21-22页
     ·病原学第22页
     ·分子生物学第22-24页
     ·流行病学第24-25页
     ·PCV2 相关疾病及流行趋势第25-28页
     ·PCV2 感染和复制机制第28-29页
     ·PCV2 疫苗第29页
   ·研究的目的和意义第29-31页
第二章 我国猪群中 TTSuVs 分子遗传变异分析第31-40页
 摘要第31页
   ·引言第31-32页
   ·材料方法第32-33页
     ·PCR 法扩增 TTSuV1 和 TTSuV2 基因组第32页
     ·病毒基因组的克隆第32页
     ·序列分析及进化树构建第32-33页
   ·结果第33-36页
     ·从 TTSuVs 阳性病料中扩增基因组第33页
     ·基因组测序第33页
     ·构建系统发育进化树第33页
     ·TTSuV1 和 TTSuV2 的同源性分析第33-36页
     ·TTSuV1 和 TTSuV2 基因组中的缺失和插入分析第36页
   ·讨论第36-40页
第三章 TTSuV1 Cap 蛋白抗原表位鉴定及其应用第40-49页
 摘要第40页
   ·引言第40-41页
   ·材料方法第41-43页
     ·细胞、质粒和抗体第41页
     ·制备鼠源多克隆抗体第41页
     ·引物设计,PCR 扩增以及重组表达质粒构建第41页
     ·截短 ORF1 表达产物的表达与鉴定第41-42页
     ·TTSuV1 Cap 抗原表位鉴定第42页
     ·TTSuV1 表位的特异性比对第42页
     ·间接 ELISA 方法的建立第42-43页
   ·结果第43-47页
     ·扩增 ORF1 截短表达基因并鉴定重组表达质粒第43-45页
     ·单抗表位与其他 TTSuV1 株的比对分析第45-46页
     ·其它毒株抗原表位区域与单抗的免疫反应性鉴定第46页
     ·猪 TTSuV1 血清抗体的检测第46-47页
   ·讨论第47-49页
第四章 TTSuV1 感染性克隆构建及病毒拯救第49-58页
 摘要第49页
   ·引言第49-50页
   ·材料和方法第50-51页
     ·材料第50页
     ·TTSuV1 基因组扩增第50页
     ·毒株拯救及其细胞传代第50-51页
     ·Western blotting 分析第51页
     ·病毒细胞定位第51页
     ·巴马猪感染试验第51页
     ·病毒体内核酸载量测定第51页
   ·结果第51-56页
     ·病毒感染性克隆的构建第51-52页
     ·拯救毒株的鉴定第52-54页
     ·病毒抗原分析第54页
     ·病毒蛋白的细胞定位第54页
     ·动物感染试验第54-55页
     ·病毒血症检测和抗体检测第55-56页
     ·病毒核酸检测第56页
     ·TTSuV1 序列验证第56页
   ·讨论第56-58页
第五章 TTSuV1 ORF1 启动子的研究第58-63页
 摘要第58页
   ·引言第58页
   ·材料和方法第58-60页
     ·细胞、质粒和 TTSuV1 基因组第58-59页
     ·TTSuV1 基因组分析第59页
     ·质粒构建第59页
     ·转染和萤光值检测第59-60页
     ·缺失 TTSuV1 基因组中的启动子第60页
     ·启动子缺失后 TTSuV1 Cap 蛋白在 ST 细胞中的表达第60页
     ·IPMA第60页
   ·结果第60-62页
     ·目的基因扩增和重组质粒构建第60-61页
     ·双荧光素酶报告系统检测 TTSuV1 启动子第61页
     ·TTSuV1 启动子的功能验证第61-62页
   ·讨论第62-63页
第六章 PCV2 毒株构象中和表位的鉴定第63-72页
 摘要第63页
   ·引言第63-64页
   ·材料方法第64-67页
     ·细胞、病毒和抗体第64页
     ·对不同 PCV2 ORF2 编码氨基酸序列分析第64页
     ·构建 PCV2-YJ/CL 和 PCV2-JF/CL 的嵌合毒和突变毒第64页
     ·体外转染实验第64-65页
     ·IPMA第65-66页
     ·病毒的繁殖动力学第66页
     ·血清中和试验第66-67页
   ·结果第67-69页
     ·不同 PCV2 毒株 ORF2 编码氨基酸序列对比第67页
     ·突变毒株与 PCV2 阳性血清和 8E4 单抗的反应性检测第67-68页
     ·重组病毒的生长动力学第68页
     ·单抗与拯救病毒的中和试验第68-69页
   ·讨论第69-72页
第七章 全文结论第72-73页
参考文献第73-83页
致谢第83-84页
作者简历第84-85页

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