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无乳链球菌表面蛋白重组制备及检测方法初步建立

摘要第1-5页
ABSTRACT第5-8页
1 前言第8-18页
   ·无乳链球菌以及其表而蛋白的研究进展第8-12页
     ·无乳链球菌的生化特性第8页
     ·无乳链球菌的致病性第8页
     ·荚膜多糖与血清学分型第8-9页
     ·无乳链球菌表面蛋白第9-12页
   ·无乳链球菌的检测方法第12-13页
     ·免疫检测法第12-13页
     ·分子生物学检测方法第13页
     ·其它检测方法第13页
   ·基因工程方法表达无乳链球菌表面蛋白第13-17页
     ·基因工程方法简介第13-14页
     ·大肠杆菌表达系统第14-16页
     ·重组质粒的构建和鉴定第16页
     ·基因工程方法在无乳链球菌表面蛋白制备方面的应用第16-17页
   ·研究目的及意义第17-18页
2 材料与方法第18-36页
   ·实验材料与仪器第18-21页
     ·实验菌株第18页
     ·实验试剂第18-19页
     ·实验仪器第19页
     ·培养基第19页
     ·溶液配制第19-21页
     ·PCR扩增所用的引物第21页
   ·实验方法第21-36页
     ·表面蛋白Rib的基因克隆与重组表达第21-30页
     ·表面蛋白Sip的基因克隆与重组表达第30-32页
     ·表面蛋白Alpha的基因克隆及重组表达第32-33页
     ·三种蛋白的质谱鉴定第33页
     ·多克隆抗体的制备第33-36页
3 结果与讨论第36-50页
   ·Rib蛋白的基因克隆与重组表达第36-40页
     ·Rib蛋白基因克隆第36页
     ·rib-pET26b重组质粒的构建第36-37页
     ·诱导表达及SDS-PAGE第37-38页
     ·重组蛋白表达条件优化及蛋白形式鉴定第38页
     ·Rib蛋白的纯化与浓度测定第38-39页
     ·Rib蛋白浓度检测第39-40页
   ·表面蛋白Sip的基因克隆与重组表达第40-43页
     ·Sip基因的克隆第40-41页
   ·sp-pET26b重组质粒的构建第41页
     ·Sip诱导表达及SDS-PAGE第41-42页
     ·Sip包涵体检测及纯化第42-43页
     ·Sip蛋白浓度检测第43页
   ·表面蛋白Alpha的基因克隆与重组表达第43-45页
     ·Alpha基因的克隆第43页
     ·alpha-pGEX-4T-1重组质粒的构建第43-44页
     ·GST-Alpha诱导表达及SDS-PAGE第44-45页
     ·GST-Alpha变性复性,可溶蛋白过柱纯化以及thrombin酶切后纯化第45页
   ·表面蛋白的质谱鉴定第45页
   ·多克隆抗体的制备第45-46页
   ·抗体对菌体吸附性的检测第46页
   ·双抗夹心ELISA第46页
   ·讨论第46-50页
     ·表面蛋白的选择第46页
     ·Rib蛋白的表达第46-47页
     ·Alpha蛋白的表达第47-48页
     ·包涵体变性复性第48页
     ·蛋白纯化以及抗原制备第48页
     ·ELISA方法第48-50页
4 结论第50-51页
5 展望第51-52页
6 参考文献第52-58页
7 攻读硕士学位期间发表论文情况第58-59页
8 致谢第59页

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