摘要 | 第1-5页 |
ABSTRACT | 第5-8页 |
1 前言 | 第8-18页 |
·无乳链球菌以及其表而蛋白的研究进展 | 第8-12页 |
·无乳链球菌的生化特性 | 第8页 |
·无乳链球菌的致病性 | 第8页 |
·荚膜多糖与血清学分型 | 第8-9页 |
·无乳链球菌表面蛋白 | 第9-12页 |
·无乳链球菌的检测方法 | 第12-13页 |
·免疫检测法 | 第12-13页 |
·分子生物学检测方法 | 第13页 |
·其它检测方法 | 第13页 |
·基因工程方法表达无乳链球菌表面蛋白 | 第13-17页 |
·基因工程方法简介 | 第13-14页 |
·大肠杆菌表达系统 | 第14-16页 |
·重组质粒的构建和鉴定 | 第16页 |
·基因工程方法在无乳链球菌表面蛋白制备方面的应用 | 第16-17页 |
·研究目的及意义 | 第17-18页 |
2 材料与方法 | 第18-36页 |
·实验材料与仪器 | 第18-21页 |
·实验菌株 | 第18页 |
·实验试剂 | 第18-19页 |
·实验仪器 | 第19页 |
·培养基 | 第19页 |
·溶液配制 | 第19-21页 |
·PCR扩增所用的引物 | 第21页 |
·实验方法 | 第21-36页 |
·表面蛋白Rib的基因克隆与重组表达 | 第21-30页 |
·表面蛋白Sip的基因克隆与重组表达 | 第30-32页 |
·表面蛋白Alpha的基因克隆及重组表达 | 第32-33页 |
·三种蛋白的质谱鉴定 | 第33页 |
·多克隆抗体的制备 | 第33-36页 |
3 结果与讨论 | 第36-50页 |
·Rib蛋白的基因克隆与重组表达 | 第36-40页 |
·Rib蛋白基因克隆 | 第36页 |
·rib-pET26b重组质粒的构建 | 第36-37页 |
·诱导表达及SDS-PAGE | 第37-38页 |
·重组蛋白表达条件优化及蛋白形式鉴定 | 第38页 |
·Rib蛋白的纯化与浓度测定 | 第38-39页 |
·Rib蛋白浓度检测 | 第39-40页 |
·表面蛋白Sip的基因克隆与重组表达 | 第40-43页 |
·Sip基因的克隆 | 第40-41页 |
·sp-pET26b重组质粒的构建 | 第41页 |
·Sip诱导表达及SDS-PAGE | 第41-42页 |
·Sip包涵体检测及纯化 | 第42-43页 |
·Sip蛋白浓度检测 | 第43页 |
·表面蛋白Alpha的基因克隆与重组表达 | 第43-45页 |
·Alpha基因的克隆 | 第43页 |
·alpha-pGEX-4T-1重组质粒的构建 | 第43-44页 |
·GST-Alpha诱导表达及SDS-PAGE | 第44-45页 |
·GST-Alpha变性复性,可溶蛋白过柱纯化以及thrombin酶切后纯化 | 第45页 |
·表面蛋白的质谱鉴定 | 第45页 |
·多克隆抗体的制备 | 第45-46页 |
·抗体对菌体吸附性的检测 | 第46页 |
·双抗夹心ELISA | 第46页 |
·讨论 | 第46-50页 |
·表面蛋白的选择 | 第46页 |
·Rib蛋白的表达 | 第46-47页 |
·Alpha蛋白的表达 | 第47-48页 |
·包涵体变性复性 | 第48页 |
·蛋白纯化以及抗原制备 | 第48页 |
·ELISA方法 | 第48-50页 |
4 结论 | 第50-51页 |
5 展望 | 第51-52页 |
6 参考文献 | 第52-58页 |
7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第58-59页 |
8 致谢 | 第59页 |