主要中英文缩写词 | 第1-5页 |
中文摘要 | 第5-6页 |
Abstract | 第6-8页 |
一 前言 | 第8-12页 |
·HEV 的基本病毒学特性 | 第8-9页 |
·HEV 基因型及不同基因型的地理分布 | 第9-10页 |
·HEV 在动物中的流行、传播途径及跨种属感染的潜在可能 | 第10-11页 |
·本课题的研究目的和内容 | 第11-12页 |
二 实验材料、试剂和仪器 | 第12-19页 |
·材料 | 第12-16页 |
·酵母双杂交系统 | 第12-14页 |
·化学发光免疫共沉淀系统 | 第14-16页 |
·试剂及配制 | 第16-18页 |
·试剂 | 第16-17页 |
·试剂配制 | 第17-18页 |
·仪器 | 第18-19页 |
三 实验技术 | 第19-21页 |
·分裂‐泛素酵母双杂交实验技术 | 第19页 |
·化学发光免疫共沉淀技术 | 第19-21页 |
四 实验方法 | 第21-36页 |
·酵母双杂交实验 | 第21-29页 |
·诱饵质粒的构建及扩增 | 第21-23页 |
·诱饵质粒转化酵母报告株 NMY51 | 第23-24页 |
·酵母双杂交诱饵质粒功能性验证 | 第24-25页 |
·酵母双杂交筛选压力的确定 | 第25-26页 |
·酵母双杂交筛选猪肝脏 cDNA 文库 | 第26-27页 |
·阳性克隆的确认以及捕获质粒的提取 | 第27-29页 |
·酵母双杂交共转化实验 | 第29页 |
·对 pPR3N-Prey 中的捕获基因进行测序和序列分析 | 第29页 |
·化学发光免疫共沉淀实验 | 第29-35页 |
·pAcGFP1‐Bait 和 pProlabel‐Prey 质粒的构建 | 第29-34页 |
·AcGFP1‐Bait 和 ProLabel‐Prey 共转染 293FT 细胞 | 第34页 |
·化学发光免疫共沉淀实验 | 第34-35页 |
·ORF2 蛋白与肝细胞相互作用蛋白的生物信息学分析 | 第35-36页 |
五 实验结果 | 第36-50页 |
·酵母双杂交筛选实验结果 | 第36-45页 |
·酵母双杂交诱饵质粒大量提取后鉴定及定量 | 第36页 |
·酵母报告株 NMY51 转化诱饵质粒后菌落 PCR 鉴定 | 第36页 |
·诱饵质粒功能性验证 | 第36-37页 |
·酵母双杂交文库筛选压力选择 | 第37-39页 |
·酵母双杂交筛选与 HEV ORF2 相互作用的猪肝细胞文库 | 第39-44页 |
·捕获蛋白亚细胞定位 | 第44-45页 |
·化学发光免疫共沉淀 | 第45-50页 |
·化学发光免疫共沉淀质粒的构建 | 第45页 |
·化学发光免疫共沉淀质粒表达鉴定 | 第45-46页 |
·化学发光免疫共沉淀结果 | 第46-47页 |
·相互作用蛋白功能富集聚类分析 | 第47-48页 |
·捕获蛋白与基因 1 型、4 型 HEV ORF2 结合力的比较 | 第48-50页 |
讨论 | 第50-53页 |
小结 | 第53-54页 |
参考文献 | 第54-59页 |
论文综述 | 第59-68页 |
参考文献 | 第65-68页 |
致谢 | 第68-69页 |