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常见的检疫性植物病毒高通量检测方法的建立和比较

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-11页
引言第11-12页
第一章 文献综述第12-23页
   ·国内外植物病毒研究现状第12-13页
     ·植物病毒的研究历史第12页
     ·植物病毒的形态及分类研究第12-13页
   ·进境植物中常见的六种检疫性病毒简介第13-16页
     ·南芥菜花叶病毒第13页
     ·烟草环斑病毒第13-14页
     ·番茄环斑病毒第14页
     ·凤仙花坏死斑病毒第14-15页
     ·鸢尾花黄斑病毒第15页
     ·番茄斑萎病毒第15-16页
   ·植物病毒检测的前处理技术第16-18页
   ·植物病毒不同检测技术及研究进展第18-23页
     ·血清学检测第18页
     ·PCR检测第18-20页
       ·荧光定量PCR第18-19页
       ·多重PCR第19-20页
     ·液相芯片检测第20-23页
第二章 植物病毒前处理方法的建立和比较第23-33页
   ·实验材料第23-24页
     ·实验材料第23页
     ·试剂第23-24页
   ·实验方法第24-28页
     ·ELISA-酶联免疫吸附法第24-25页
     ·引物的设计和合成第25页
     ·RNApreppure植物总RNA提取第25-26页
     ·反转录合成cDNA第26页
     ·PCR扩增条件第26页
     ·SYBRGreen I 实时荧光RT-PCR反应第26-27页
     ·PEG前处理第27页
     ·免疫磁珠前处理第27-28页
     ·灵敏度比较第28页
   ·结果与分析第28-31页
     ·ELISA初筛第28页
     ·普通RT-PCR检测第28-30页
     ·SYBRGreenI实时荧光RT-PCR检测第30页
     ·不同处理方法的灵敏度的比较第30-31页
     ·不同处理方法对进境百合样品的检测第31页
   ·讨论第31-33页
第三章 百合常见病毒的多重检测第33-48页
   ·材料与设备第33-34页
     ·实验材料第33页
     ·仪器设备第33-34页
   ·实验方法第34-37页
     ·病毒接种第34页
     ·RNA的提取第34页
     ·引物的设计第34-35页
     ·反转录体系第35-36页
     ·PCR检测第36页
     ·单一和多重SYBR- Green RT-PCR检测第36-37页
     ·特异性和灵敏度分析第37页
     ·数据分析第37页
   ·结果与分析第37-46页
     ·引物的特异性和融解曲线分析第37-38页
     ·95%置信区间的确定第38-39页
     ·三种病毒的多重检测第39-42页
     ·RT-PCR灵敏度实验第42-44页
     ·SYBRGreenIReal-timePCR的灵敏度第44-46页
   ·结论第46-48页
第四章 三种番茄斑萎病毒属病毒的液相芯片检测第48-56页
   ·材料与方法第49页
     ·试剂第49页
     ·仪器设备第49页
   ·实验方法第49-52页
     ·提纯血清第49-50页
     ·抗体与微球偶联第50页
     ·抗体的生物素标记第50页
     ·阴性对照池(pool)的制备方法第50-51页
     ·液相蛋白芯片单一病毒检测程序第51页
     ·最佳试验条件的确定第51页
     ·检测2种病毒的Plex检测体系建立第51页
     ·液相蛋白芯片检测方法阴阳性临界值——阈值的计算第51页
     ·液相蛋白芯片特异性检测第51页
     ·液相蛋白芯片技术的与ELISA方法的比较第51-52页
   ·结果第52-54页
     ·最佳试验条件的确定第52页
     ·液相蛋白芯片检测方法阴阳性临界值第52页
     ·液相蛋白芯片特异性检测第52-53页
     ·液相芯片的多重检测第53页
     ·灵敏度比较第53-54页
   ·结果与讨论第54-56页
参考文献第56-60页
附录第60-65页
致谢第65页

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