摘要 | 第1-7页 |
ABSTRACT | 第7-11页 |
引言 | 第11-12页 |
第一章 文献综述 | 第12-23页 |
·国内外植物病毒研究现状 | 第12-13页 |
·植物病毒的研究历史 | 第12页 |
·植物病毒的形态及分类研究 | 第12-13页 |
·进境植物中常见的六种检疫性病毒简介 | 第13-16页 |
·南芥菜花叶病毒 | 第13页 |
·烟草环斑病毒 | 第13-14页 |
·番茄环斑病毒 | 第14页 |
·凤仙花坏死斑病毒 | 第14-15页 |
·鸢尾花黄斑病毒 | 第15页 |
·番茄斑萎病毒 | 第15-16页 |
·植物病毒检测的前处理技术 | 第16-18页 |
·植物病毒不同检测技术及研究进展 | 第18-23页 |
·血清学检测 | 第18页 |
·PCR检测 | 第18-20页 |
·荧光定量PCR | 第18-19页 |
·多重PCR | 第19-20页 |
·液相芯片检测 | 第20-23页 |
第二章 植物病毒前处理方法的建立和比较 | 第23-33页 |
·实验材料 | 第23-24页 |
·实验材料 | 第23页 |
·试剂 | 第23-24页 |
·实验方法 | 第24-28页 |
·ELISA-酶联免疫吸附法 | 第24-25页 |
·引物的设计和合成 | 第25页 |
·RNApreppure植物总RNA提取 | 第25-26页 |
·反转录合成cDNA | 第26页 |
·PCR扩增条件 | 第26页 |
·SYBRGreen I 实时荧光RT-PCR反应 | 第26-27页 |
·PEG前处理 | 第27页 |
·免疫磁珠前处理 | 第27-28页 |
·灵敏度比较 | 第28页 |
·结果与分析 | 第28-31页 |
·ELISA初筛 | 第28页 |
·普通RT-PCR检测 | 第28-30页 |
·SYBRGreenI实时荧光RT-PCR检测 | 第30页 |
·不同处理方法的灵敏度的比较 | 第30-31页 |
·不同处理方法对进境百合样品的检测 | 第31页 |
·讨论 | 第31-33页 |
第三章 百合常见病毒的多重检测 | 第33-48页 |
·材料与设备 | 第33-34页 |
·实验材料 | 第33页 |
·仪器设备 | 第33-34页 |
·实验方法 | 第34-37页 |
·病毒接种 | 第34页 |
·RNA的提取 | 第34页 |
·引物的设计 | 第34-35页 |
·反转录体系 | 第35-36页 |
·PCR检测 | 第36页 |
·单一和多重SYBR- Green RT-PCR检测 | 第36-37页 |
·特异性和灵敏度分析 | 第37页 |
·数据分析 | 第37页 |
·结果与分析 | 第37-46页 |
·引物的特异性和融解曲线分析 | 第37-38页 |
·95%置信区间的确定 | 第38-39页 |
·三种病毒的多重检测 | 第39-42页 |
·RT-PCR灵敏度实验 | 第42-44页 |
·SYBRGreenIReal-timePCR的灵敏度 | 第44-46页 |
·结论 | 第46-48页 |
第四章 三种番茄斑萎病毒属病毒的液相芯片检测 | 第48-56页 |
·材料与方法 | 第49页 |
·试剂 | 第49页 |
·仪器设备 | 第49页 |
·实验方法 | 第49-52页 |
·提纯血清 | 第49-50页 |
·抗体与微球偶联 | 第50页 |
·抗体的生物素标记 | 第50页 |
·阴性对照池(pool)的制备方法 | 第50-51页 |
·液相蛋白芯片单一病毒检测程序 | 第51页 |
·最佳试验条件的确定 | 第51页 |
·检测2种病毒的Plex检测体系建立 | 第51页 |
·液相蛋白芯片检测方法阴阳性临界值——阈值的计算 | 第51页 |
·液相蛋白芯片特异性检测 | 第51页 |
·液相蛋白芯片技术的与ELISA方法的比较 | 第51-52页 |
·结果 | 第52-54页 |
·最佳试验条件的确定 | 第52页 |
·液相蛋白芯片检测方法阴阳性临界值 | 第52页 |
·液相蛋白芯片特异性检测 | 第52-53页 |
·液相芯片的多重检测 | 第53页 |
·灵敏度比较 | 第53-54页 |
·结果与讨论 | 第54-56页 |
参考文献 | 第56-60页 |
附录 | 第60-65页 |
致谢 | 第65页 |