| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 符号说明 | 第7-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-24页 |
| 1. 猪传染性胸膜肺炎的病原学 | 第10-11页 |
| 2. 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌主要毒力因子的研究进展 | 第11-17页 |
| ·荚膜多糖(capsule CP) | 第11-12页 |
| ·脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS) | 第12-13页 |
| ·外膜蛋白(Outermembraneproteins,OMP) | 第13-14页 |
| ·转铁结合蛋白(Transferrin Binding Proteins,Tbp) | 第14页 |
| ·溶血外毒素(Actinobacillus pleuropneumoniae-RTX-toxins,Apx) | 第14-17页 |
| 3. 猪传染性胸膜肺炎疫苗的研究进展 | 第17-21页 |
| ·全菌灭活疫苗 | 第18-19页 |
| ·亚单位疫苗 | 第19-20页 |
| ·弱毒活疫苗 | 第20-21页 |
| 4. 猪传染性胸膜肺炎ELISA诊断方法的研究进展 | 第21-23页 |
| ·型特异性ELISA | 第21页 |
| ·种特异性ELISA | 第21-23页 |
| 5. 研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二部分 实验部分 | 第24-58页 |
| 1. 材料与方法 | 第24-38页 |
| ·实验材料 | 第24-27页 |
| ·细菌菌株 | 第24页 |
| ·载体与质粒 | 第24-25页 |
| ·主要药品及试剂 | 第25页 |
| ·主要培养基和抗生素 | 第25-26页 |
| ·细菌基因组DNA提取试剂 | 第26页 |
| ·大肠杆菌感受态制备试剂 | 第26页 |
| ·其它缓冲液及试剂 | 第26-27页 |
| ·实验动物 | 第27页 |
| ·引物 | 第27页 |
| ·主要设备 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-38页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎放线杆菌生长曲线的测定 | 第27-28页 |
| ·APP基因组DNA的提取 | 第28-29页 |
| ·ApxⅡA原核表达载体的构建 | 第29-32页 |
| ·ApxⅡA原核表达 | 第32-33页 |
| ·rApxⅡA包涵体的制备、洗涤和溶解 | 第33-34页 |
| ·rApxⅡA的纯化和复性 | 第34页 |
| ·天然毒素Ⅱ的提取 | 第34-35页 |
| ·rApxⅡA和天然毒素Ⅱ的溶血实验 | 第35页 |
| ·全菌灭活苗的制备和免疫 | 第35-36页 |
| ·ApxⅡA间接ELISA检测方法的建立和抗体水平的检测 | 第36-37页 |
| ·ApxⅡA免疫小鼠的免疫保护性试验 | 第37-38页 |
| 2. 结果 | 第38-53页 |
| ·传染性胸膜肺炎放线杆菌生长曲线的测定 | 第38-40页 |
| ·APP血清1型生长曲线 | 第38-39页 |
| ·APP血清7型生长曲线 | 第39-40页 |
| ·ApxⅡA原核表达载体的构建 | 第40-46页 |
| ·ApxⅡA片段的扩增 | 第40-41页 |
| ·PCR产物的电泳测定、回收与纯化 | 第41-42页 |
| ·克隆载体的酶切鉴定 | 第42-43页 |
| ·ApxⅡA的测序 | 第43-45页 |
| ·重组表达质粒pET-ApxⅡA的构建、筛选与鉴定 | 第45-46页 |
| ·ApxⅡA原核表达 | 第46-48页 |
| ·诱导表达 | 第46页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE检测 | 第46-47页 |
| ·表达产物的Western-blot分析 | 第47-48页 |
| ·ApxⅡA包涵体的制备、洗涤和溶解 | 第48页 |
| ·ApxⅡA重组蛋白的纯化 | 第48-49页 |
| ·天然毒素Ⅱ的提取 | 第49-50页 |
| ·ApxⅡA和天然毒素Ⅱ的溶血试验 | 第50页 |
| ·ApxⅡA间接ELISA检测方法的建立和抗体水平的检测 | 第50-51页 |
| ·最佳反应条件的确定 | 第50页 |
| ·抗体水平的检测 | 第50-51页 |
| ·ApxⅡA免疫小鼠的免疫保护性试验 | 第51-53页 |
| ·ApxⅡA免疫小鼠的攻毒试验 | 第51-53页 |
| 3. 讨论 | 第53-57页 |
| ·关于利用ApxⅡ毒素作为研究的目的 | 第53页 |
| ·关于ApxⅡA基因的克隆 | 第53-54页 |
| ·关于PET-ApxⅡA的表达 | 第54-55页 |
| ·关于ApxⅡA表达产物的免疫原性 | 第55-57页 |
| 4. 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附录 | 第68-70页 |
