| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 第1章 文献综述 | 第9-23页 |
| ·t-PA 的研究进展 | 第9-11页 |
| ·t-PA 发展简史 | 第9-10页 |
| ·t-PA 的生物学活性 | 第10-11页 |
| ·t-PA 的功能及应用 | 第11页 |
| ·产蛋鸡卵黄中营养物的转运与沉积的研究 | 第11-12页 |
| ·apo-B100 对VLDLy 组装过程的影响 | 第11-12页 |
| ·VLDLy 在卵黄中沉积的过程 | 第12页 |
| ·绿色荧光蛋白的研究进展 | 第12-15页 |
| ·绿色荧光蛋白的特点 | 第13页 |
| ·绿色荧光蛋白的应用 | 第13-15页 |
| ·减毒沙门氏菌载体系统的研究进展 | 第15-17页 |
| ·沙门氏菌的侵入途径 | 第15-16页 |
| ·减毒沙门氏菌的研究 | 第16页 |
| ·减毒沙门氏菌作为活载体的研究 | 第16-17页 |
| ·转基因家禽生物反应器的研究进展 | 第17-20页 |
| ·家禽的生理特点 | 第17-18页 |
| ·家禽作为生物反应器的独特优势 | 第18页 |
| ·常规转基因动物技术在家禽转基因应用中的局限性 | 第18-20页 |
| ·利用转基因动物生物反应器生产t-PA | 第20-22页 |
| ·t-PA 在原核和真核细胞中的表达 | 第20页 |
| ·t-PA 在转基因动物乳腺中的表达 | 第20-21页 |
| ·t-PA 的纯化和检测 | 第21-22页 |
| ·问题与展望 | 第22-23页 |
| 第2章 真核表达质粒pEGFP-N1-apo-tPA 的构建及鉴定 | 第23-33页 |
| ·材料 | 第23-25页 |
| ·主要试剂 | 第23-24页 |
| ·主要溶液及配制方法 | 第24-25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25页 |
| ·DNA 分析软件 | 第25页 |
| ·试验方法 | 第25-30页 |
| ·基础载体和表达载体 | 第25页 |
| ·构建pEGFP-N1-apo-tPA 表达载体 | 第25-26页 |
| ·引物设计与合成 | 第26页 |
| ·apo-tPA 蛋白基因的扩增、回收纯化、克隆 | 第26-27页 |
| ·连接产物的转化、质粒提取及鉴定 | 第27-29页 |
| ·Apo-tPA 基因融合与pEGFP-N_1-apo-tPA 表达载体构建 | 第29-30页 |
| ·结果与分析 | 第30-32页 |
| ·目的基因的克隆 | 第30页 |
| ·pMD18-T-apo-tPA 质粒的PCR 鉴定和酶切鉴定 | 第30-31页 |
| ·pEGFP-N_1-apo-tPA 质粒的PCR 鉴定和酶切鉴定 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| 第3章 pEGFP-N_1-apo-tPA 质粒在鸡胚成纤维细胞中的表达 | 第33-41页 |
| ·材料与试剂 | 第33-35页 |
| ·主要试验材料 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·主要溶液及配置方法 | 第34-35页 |
| ·试验方法 | 第35-37页 |
| ·鸡胚成纤维细胞的分离和体外培养 | 第35页 |
| ·pEGFP-N_1-apo-tPA 质粒对成纤维细胞的转染 | 第35页 |
| ·鸡胚成纤维细胞中表达产物的定性检测 | 第35-36页 |
| ·鸡胚成纤维细胞中表达产物的ELISA 检测 | 第36页 |
| ·鸡胚成纤维细胞中表达产物的体外活性检测 | 第36-37页 |
| ·结果与分析 | 第37-39页 |
| ·鸡胚成纤维细胞的体外培养 | 第37页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 电泳检测 | 第37-38页 |
| ·成纤维细胞中表达产物的荧光镜检 | 第38页 |
| ·成纤维细胞中表达产物的ELISA 检测 | 第38-39页 |
| ·鸡胚成纤维细胞中表达产物的活性检测 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 第4章 减毒鼠伤寒沙门氏菌Δcrp SL1344 作为活载体的研究 | 第41-49页 |
| ·材料与试剂 | 第41-42页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·主要培养基及抗生素的配制 | 第42页 |
| ·试验方法 | 第42-43页 |
| ·重组减毒鼠伤寒沙门氏菌Δcrp SL1344 (pEGFP-N_1-apo-tPA)的构建 | 第42-43页 |
| ·重组减毒鼠伤寒沙门氏菌的稳定性 | 第43页 |
| ·重组减毒鼠伤寒沙门氏菌的转染 | 第43页 |
| ·重组减毒鼠伤寒沙门氏菌分布检测 | 第43页 |
| ·减毒鼠伤寒沙门氏菌作为载体的研究 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-47页 |
| ·重组减毒鼠伤寒沙门氏菌Δcrp SL1344(pEGFP-N_1-apo-tPA)构建及鉴定 | 第43-45页 |
| ·重组减毒鼠伤寒沙门氏菌的稳定性 | 第45页 |
| ·重组减毒鼠伤寒沙门氏菌分布检测 | 第45-46页 |
| ·减毒鼠伤寒沙门氏菌作为载体的研究 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| 第5章 重组减毒鼠伤寒沙门氏菌Δcrp SL1344 (pEGFP-N1-apo-tPA)鸡体内表达及卵黄中沉积 | 第49-57页 |
| ·试验材料 | 第50页 |
| ·材料 | 第50页 |
| ·主要器械及仪器 | 第50页 |
| ·主要溶液及配制方法 | 第50页 |
| ·试验方法 | 第50-52页 |
| ·减毒鼠伤寒沙门氏菌介导法 | 第50-51页 |
| ·融合蛋白在鸡蛋中的定性表达检测 | 第51页 |
| ·融合蛋白在鸡蛋中的定量检测 | 第51-52页 |
| ·融合蛋白在卵黄中的活性表达检测 | 第52页 |
| ·结果分析 | 第52-55页 |
| ·卵黄中融合蛋白的SDS-PAGE 电泳及其荧光镜检 | 第52-53页 |
| ·Apo-t-PA-GFP 融合蛋白在卵黄表达含量的检测 | 第53-54页 |
| ·卵黄中融合蛋白的活性检测 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 第6章 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 缩略语词汇表 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第67页 |
