摘要 | 第1-4页 |
ABSTRACT | 第4-9页 |
第1章 文献综述 | 第9-25页 |
·伪狂犬病研究进展 | 第9-11页 |
·伪狂犬病的流行现状 | 第9-10页 |
·伪狂犬病的流行病学研究 | 第10-11页 |
·伪狂犬病的临床症状 | 第11页 |
·伪狂犬病的诊断方法 | 第11-13页 |
·临床诊断和病理组织学检查 | 第11页 |
·动物接种试验 | 第11页 |
·血清学诊断方法 | 第11-13页 |
·分子生物学诊断 | 第13页 |
·伪狂犬病的防治办法 | 第13页 |
·伪狂犬病毒特征 | 第13-17页 |
·伪狂犬病毒的基因组 | 第14页 |
·伪狂犬病毒的主要糖蛋白 | 第14-15页 |
·伪狂犬病毒的感染,增殖和释放 | 第15-16页 |
·伪狂犬病毒的侵染途径 | 第16-17页 |
·单克隆抗体技术及其应用 | 第17-19页 |
·单克隆抗体技术 | 第17页 |
·单克隆抗体研制现状 | 第17-18页 |
·单克隆抗体的应用 | 第18-19页 |
·原核表达系统研究 | 第19-24页 |
·大肠杆菌表达系统 | 第19-21页 |
·外源基因在大肠杆菌细胞中的表达 | 第21-23页 |
·pET 表达系统 | 第23-24页 |
·本研究的意义 | 第24-25页 |
第2章 猪伪狂犬病毒杂交瘤细胞株的建立 | 第25-49页 |
·试验仪器和材料 | 第25-28页 |
·主要实验材料 | 第25页 |
·主要仪器设备 | 第25-26页 |
·主要培养基的配制 | 第26页 |
·主要试剂的配制 | 第26-28页 |
·试验方法 | 第28-35页 |
·伪狂犬病毒的培养、纯化和鉴定 | 第28-30页 |
·免疫接种 | 第30-31页 |
·抗原最佳包被浓度和最佳血清稀释度的确定 | 第31页 |
·杂交瘤细胞的制备 | 第31-32页 |
·阳性杂交瘤细胞孔的筛选 | 第32-33页 |
·阳性杂交瘤细胞的克隆 | 第33-34页 |
·杂交瘤细胞培养上清效价及特异性的测定 | 第34页 |
·杂交瘤细胞的扩大培养与保存 | 第34页 |
·单克隆抗体的大量制备 | 第34-35页 |
·单克隆抗体效价的及特异性测定 | 第35页 |
·实验结果及分析 | 第35-45页 |
·讨论 | 第45-49页 |
第3章 gB 基因编码蛋白抗原表位区的表达 | 第49-63页 |
·主要试剂盒、酶、载体和细胞 | 第49页 |
·主要试剂 | 第49-50页 |
·试验方法 | 第50-54页 |
·引物的设计与合成 | 第50页 |
·伪狂犬病毒模板DNA 的提取 | 第50页 |
·PCR 最佳退火温度的确定 | 第50页 |
·目的片段的克隆 | 第50-51页 |
·目的片段的回收 | 第51页 |
·目的片段与T 载体的连接 | 第51页 |
·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第51页 |
·重组质粒pMD18-T-gB 的转化 | 第51-52页 |
·质粒DNA 的提取 | 第52页 |
·重组质粒pMD18-T-gB 的鉴定 | 第52页 |
·重组质粒pMD18-T-gB 的双酶切 | 第52页 |
·原核表达载体pET-28a 的双酶切 | 第52页 |
·回收目的片段 | 第52-53页 |
·目的基因与pET-28a 载体的连接 | 第53页 |
·重组质粒pET-28a-gB 的转化 | 第53页 |
·质粒DNA 的提取 | 第53页 |
·重组质粒pET-28a-gB 的鉴定 | 第53页 |
·重组质粒在大肠杆菌 BL21 中的诱导表达 | 第53页 |
·表达蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析 | 第53-54页 |
·表达产物的Western-Blot 鉴定 | 第54页 |
·试验结果及分析 | 第54-60页 |
·讨论 | 第60-63页 |
第4章 结论 | 第63-64页 |
·猪伪狂犬病毒杂交瘤细胞株的建立 | 第63页 |
·gB 基因编码蛋白抗原表位的表达 | 第63-64页 |
参考文献 | 第64-67页 |
缩略词 | 第67-68页 |
致谢 | 第68-69页 |
攻读硕士学位期间的研究成果 | 第69页 |