| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-23页 |
| ·IL-5 的来源 | 第11-12页 |
| ·IL-5 蛋白结构和理化性质 | 第12页 |
| ·IL-5 生物学活性 | 第12-14页 |
| ·IL-5 受体（IL-5R）的结构与功能 | 第14页 |
| ·IL-5 与哮喘和鼻炎 | 第14-16页 |
| ·IL-5 与粘膜免疫 | 第16-17页 |
| ·IL-5 的应用 | 第17-19页 |
| ·作为免疫治疗剂 | 第17-18页 |
| ·作为免疫佐剂 | 第18-19页 |
| ·临床应用 | 第19页 |
| ·禽痘病毒 | 第19-21页 |
| ·禽痘病毒分子生物学特征 | 第19-20页 |
| ·禽痘病毒作为载体的研究 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的意义 | 第21-23页 |
| 第2章 鸡 IL-5 基因的克隆分析 | 第23-39页 |
| ·实验材料 | 第23-24页 |
| ·实验动物 | 第23页 |
| ·实验菌株 | 第23页 |
| ·实验试剂 | 第23页 |
| ·实验溶液配制 | 第23-24页 |
| ·实验仪器 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-30页 |
| ·鸡IL-5 基因引物设计 | 第25页 |
| ·鸡脾脏淋巴细胞总RNA 的提取 | 第25页 |
| ·IL-5 RT-PCR 及检测 | 第25-26页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第26-27页 |
| ·JM109 感受态细胞的制备（CaC1_2 法） | 第27页 |
| ·目的片段与T 载体的连接转化 | 第27-28页 |
| ·菌落PCR 鉴定 | 第28页 |
| ·重组质粒的提取 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定 | 第29页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·结果 | 第30-35页 |
| ·鸡IL-5 基因cDNA 的克隆 | 第30-31页 |
| ·菌落PCR 鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第32页 |
| ·pMD18-T-IL-5 测序鉴定 | 第32-33页 |
| ·鸡IL-5 基因序列分析 | 第33-35页 |
| ·讨论 | 第35-39页 |
| 第3章 鸡 IL-5 基因的原核表达及蛋白纯化 | 第39-53页 |
| ·实验材料 | 第39-41页 |
| ·实验菌株及试剂 | 第39页 |
| ·SDS-PAGE 相关溶液的配制 | 第39-40页 |
| ·Western Blot 相关溶液 | 第40页 |
| ·包涵体纯化相关溶液 | 第40-41页 |
| ·Ni-NTA 纯化、复性相关溶液 | 第41页 |
| ·考马斯亮兰G-250 染料 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-46页 |
| ·鸡IL-5 基因原核表达载体的构建 | 第41-43页 |
| ·鸡IL-5 蛋白的诱导表达 | 第43页 |
| ·SDS-PAGE 电泳鉴定 | 第43-44页 |
| ·Western Blot 鉴定 | 第44-45页 |
| ·融合蛋白的表达分析 | 第45页 |
| ·包涵体纯化 | 第45页 |
| ·重组蛋白纯化复性 | 第45-46页 |
| ·用Bradford 法检测重组蛋白的浓度 | 第46页 |
| ·结果 | 第46-51页 |
| ·载体构建 | 第46-47页 |
| ·IL-5 蛋白的诱导表达 | 第47-48页 |
| ·Western Blot 鉴定 | 第48页 |
| ·融合蛋白的表达分析 | 第48-49页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第49-50页 |
| ·Bradford 法测蛋白浓度 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| ·原核表达 | 第51页 |
| ·蛋白纯化 | 第51-53页 |
| 第4章 兔抗鸡 IL-5 多克隆抗体的制备 | 第53-57页 |
| ·材料 | 第53页 |
| ·方法 | 第53-54页 |
| ·抗原的制备 | 第53页 |
| ·免疫过程 | 第53页 |
| ·多克隆抗体血清的采取 | 第53-54页 |
| ·多抗效价及免疫特异性检测 | 第54页 |
| ·结果 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 第5章 表达鸡 IL-5 重组鸡痘病毒的构建 | 第57-66页 |
| ·材料 | 第57-58页 |
| ·载体和细胞 | 第57页 |
| ·试剂 | 第57页 |
| ·溶液配制 | 第57-58页 |
| ·方法 | 第58-61页 |
| ·重组质粒的构建 | 第58-59页 |
| ·鸡胚成纤维细胞的制备 | 第59页 |
| ·病毒的增值 | 第59-60页 |
| ·转染时亲本毒量的确定 | 第60页 |
| ·病毒转染 | 第60页 |
| ·组鸡痘病毒的筛选与纯化 | 第60页 |
| ·重组鸡痘病毒的PCR 鉴定 | 第60-61页 |
| ·目的蛋白的Western blot 检测 | 第61页 |
| ·结果 | 第61-64页 |
| ·转染时所用亲本毒的定量 | 第61-62页 |
| ·鸡痘病毒的重组 | 第62-63页 |
| ·重组鸡痘病毒的PCR 鉴定 | 第63页 |
| ·目的片段的Western blot 检测 | 第63-64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| 第6章 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第75页 |