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农药氟虫腈作用下斑马鱼miR-155对UHRF1的调控作用

摘要第1-8页
Abstract第8-14页
第一章 文献综述第14-28页
 1 miRNA 简介第14-23页
   ·miRNA 的特征、产生与作用机制第14-16页
     ·miRNA 的生物学特征第14页
     ·miRNA 的加工和作用机制第14-16页
   ·miRNA 与疾病的关系第16页
   ·miRNA 及靶基因研究方法第16-23页
     ·生物信息学第16-18页
     ·生物学实验方法第18-23页
       ·实时荧光定量 PCR第19-22页
       ·Western blot 方法第22-23页
 2 多功能 miRNA— miR155第23-24页
   ·miR155 参与炎症反应第23页
   ·miR155 对肿瘤发生的作用第23-24页
     ·miR155 与白血病第24页
 3 有关 UHRFl 的研究第24-25页
 4 分子毒理学第25-28页
   ·分子毒理学与基因表达研究第25页
   ·农药第25-27页
     ·氟虫腈第26-27页
   ·斑马鱼第27-28页
第二章 实验方案设计第28-30页
 1 研究目的和意义第28页
 2 研究主要内容第28-29页
 3 实验流程图第29-30页
第三章 材料与方法第30-42页
 1 材料与试剂第30-34页
   ·材料第30页
   ·主要仪器及材料第30-31页
   ·反转录茎环引物及 PCR 引物第31-32页
   ·试剂及其来源第32-34页
 2 方法第34-42页
   ·样本处理第34页
   ·斑马鱼总 RNA 的提取第34-35页
     ·总 RNA 的定量和完整性检测第34-35页
     ·总 RNA 的 DNase I(RNase free)消化处理第35页
   ·斑马鱼 miR155 靶基因筛选第35-36页
   ·miRNA 茎环引物及 PCR 引物设计第36-37页
     ·miRNA 茎环引物设计第36页
     ·PCR 引物设计第36-37页
   ·miRNA 和 mRNA 表达的检测和分析第37-38页
     ·cDNA 第一链的合成(RT)第37-38页
   ·荧光定量第38-39页
     ·miRNA 的表达的定量分析第38页
     ·mRNA 的表达定量分析第38页
     ·荧光定量 PCR 过程第38-39页
     ·数据处理及统计分析第39页
   ·蛋白提取、蛋白定量及 western blot第39-42页
     ·全鱼总蛋白提取第39页
     ·斑马鱼蛋白定量(BCA 法测定蛋白浓度)第39-40页
     ·Western blot 具体步骤第40-42页
第四章 结果与分析第42-57页
 1 总 RNA 样本质量的检测第42页
 2 miR155 靶基因预测第42-51页
   ·miR155 生物学分析第43-44页
   ·UHRF1 生物信息学分析第44-51页
     ·斑马鱼 UHRF1 基因序列第44页
     ·UHRF1 蛋白卷曲螺旋预测第44-45页
     ·UHRF1 蛋白保守结构域预测第45页
     ·UHRF1 蛋白二级结构预测第45-46页
     ·UHRF1 蛋白氨基酸疏水性/亲水性预测第46-47页
     ·UHRF1 蛋白信号肽预测第47-49页
     ·斑马鱼 UHRF1 蛋白同源性的分析与进化树的构建第49-50页
     ·UHRF1 蛋白定位预测第50-51页
     ·miR155 结合位点预测第51页
 3 miR155 及其潜在靶基因 UHRF1 荧光定量结果第51-54页
   ·不同处理斑马鱼 miR155,UHRF1 的差异性表达分析第52-54页
   ·miR155 和及其潜在靶基因 UHRF1 的相对表达变化量软件分析第54页
 4 UHRF1 蛋白表达的检测与分析第54-57页
   ·蛋白定量标准曲线绘制第54-55页
   ·斑马鱼样本蛋白浓度测定第55页
   ·UHRF1 蛋白化学发光显影结果及软件分析第55-57页
第五章 讨论和分析第57-59页
第六章 总结与展望第59-60页
参考文献第60-63页
附录一 重要试剂的配制第63-68页

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