| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 第一章. 甲壳动物的先天免疫及疾病防治综述 | 第11-21页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 一、甲壳动物的先天免疫 | 第12-15页 |
| 1. 物理防御 | 第12页 |
| 2. 细胞免疫 | 第12-13页 |
| 3. 体液免疫 | 第13-15页 |
| 二、甲壳动物常见病原及防治研究进展 | 第15-18页 |
| 1. 白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV) | 第15-16页 |
| 2. 鳗弧菌(Vibro anguillarum) | 第16页 |
| 3. 病毒囊膜蛋白可以作为疫苗防治白斑病毒的研究进展 | 第16-18页 |
| 三、C-型凝集素(C-Type Lectin)的研究进展 | 第18-20页 |
| 四、本论文的研究目的、内容和主要技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章. VP28体内表达载体可提高克氏原螯虾对白斑病毒的抵御能力 | 第21-37页 |
| 一、引言 | 第21-22页 |
| 二、材料方法 | 第22-25页 |
| ·实验动物准备 | 第22页 |
| ·白斑病毒的准备 | 第22页 |
| ·表达质粒的构建:pIevp28,pIevp19以及pIe | 第22-23页 |
| ·实验动物的免疫注射与病毒刺激 | 第23页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第23-24页 |
| ·蛋白免疫印记 | 第24页 |
| ·免疫组织化学法对WSSV的囊膜蛋白进行定位 | 第24-25页 |
| ·死亡率检测 | 第25页 |
| ·含有重组质粒的大肠杆菌饲喂实验 | 第25页 |
| 三、结果 | 第25-34页 |
| ·重组质粒构建完成 | 第25-26页 |
| ·表达载体pIevp28可以大幅提高螯虾感染白斑病毒之后的存活率 | 第26-27页 |
| ·pIevp28质粒可以明显的抑制白斑病毒在螯虾体内的复制 | 第27-28页 |
| ·pIevp28中的VP28片段在螯虾体内可以转录并翻译 | 第28-32页 |
| ·免疫组织化学法表明VP28在螯虾体内主要粘附与细胞膜上 | 第32-33页 |
| ·在喂食含有pIevp28载体的大肠杆菌之后,VP 28蛋白可以在螯虾体内表达并起到与注射载体类似的抗病毒功效 | 第33-34页 |
| 四、讨论 | 第34-37页 |
| 第三章. 利用体内过表达载体研究克氏原螯虾C-型凝集素4(PcLec4)的功能 | 第37-50页 |
| 一.前言 | 第37-38页 |
| 二.材料方法 | 第38-42页 |
| ·涉及的主要生化试剂 | 第38页 |
| ·实验动物的准备与免疫刺激 | 第38-39页 |
| ·总RNA提取并逆转录为cDNA | 第39页 |
| ·RACE法扩增PcLec4的序列全长 | 第39页 |
| ·序列分析 | 第39页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第39-40页 |
| ·重组蛋白的表达和纯化以及多克隆抗体制备 | 第40页 |
| ·蛋白免疫印记 | 第40页 |
| ·重组蛋白的细菌结合实验 | 第40-41页 |
| ·糖结合实验 | 第41页 |
| ·体内过表达实验 | 第41-42页 |
| ·细菌清除实验 | 第42页 |
| 三.结果 | 第42-47页 |
| ·PcLec4的序列分析结果 | 第42-43页 |
| ·PcLec4的进化系统树分析 | 第43-44页 |
| ·PcLec4的蛋白表达模式 | 第44-45页 |
| ·PcLce4受病原刺激后的表达模式 | 第45-46页 |
| ·重组蛋白对不同细菌的结合能力 | 第46页 |
| ·重组PcLec4蛋白可以对来自病原菌的多糖具有很好的结合能力 | 第46-47页 |
| ·重组PcLec4蛋白的体内过表达及促清除作用 | 第47页 |
| 四.讨论 | 第47-50页 |
| 论文总结 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第60页 |
