| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-26页 |
| ·环糊精糖基转移酶(CGT 酶)概述 | 第10-11页 |
| ·环糊精糖基转移酶(CGT 酶)的来源 | 第10页 |
| ·环糊精糖基转移酶(CGT 酶)的催化机制 | 第10-11页 |
| ·大肠杆菌系统生产环糊精糖基转移酶(CGT 酶)的研究进展 | 第11-13页 |
| ·表达载体及启动子 | 第11页 |
| ·信号肽 | 第11-12页 |
| ·发酵优化 | 第12-13页 |
| ·密码子偏好性对异源蛋白表达的影响 | 第13-15页 |
| ·存在密码子偏好性的原因 | 第13页 |
| ·密码子的使用影响异源蛋白表达的机理 | 第13-14页 |
| ·密码子偏好性的表征方法 | 第14页 |
| ·基于密码子偏好性提高异源表达的方法 | 第14-15页 |
| ·巨大芽孢杆菌表达系统 | 第15-23页 |
| ·巨大芽孢杆菌概述 | 第15-16页 |
| ·B. megaterium 的分子生物学操作 | 第16页 |
| ·B. megaterium 的启动子系统 | 第16-18页 |
| ·B. megaterium 的分泌系统 | 第18-19页 |
| ·B. megaterium 的表达载体 | 第19-20页 |
| ·B. megaterium 的宿主基因的改造 | 第20-21页 |
| ·B. megaterium 的表达系统的应用 | 第21-22页 |
| ·B. megaterium 的表达系统的不足及展望 | 第22-23页 |
| ·立题依据及意义 | 第23页 |
| ·主要研究内容 | 第23-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-34页 |
| ·菌种和质粒 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| ·试剂、酶、MAKER 及相关试剂盒 | 第27页 |
| ·分子生物学操作 | 第27-31页 |
| ·密码子的优化 | 第27页 |
| ·基因组和质粒提取 | 第27页 |
| ·目的片段及载体纯化 | 第27-28页 |
| ·菌落 PCR | 第28页 |
| ·重组表达载体构建 | 第28-29页 |
| ·巨大芽孢杆菌中总 RNA 的提取及 RT-PCR 分析 | 第29-30页 |
| ·巨大芽孢杆菌原生质体的制备与转化 | 第30-31页 |
| ·培养条件 | 第31-32页 |
| ·重组大肠杆菌体系的培养条件 | 第31页 |
| ·重组巨大芽孢杆菌体系的培养条件 | 第31-32页 |
| ·分析方法 | 第32-34页 |
| ·菌体生物量的测定 | 第32页 |
| ·细胞中不同组分 -CGTase 的制备 | 第32页 |
| ·-CGTase 环化活力的测定 | 第32页 |
| ·SDS-PAGE 检测 | 第32页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第32页 |
| ·环糊精检测 | 第32-33页 |
| ·甘油残量及木糖残量的检测 | 第33-34页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第34-52页 |
| ·基于密码子优化的 -CGT 酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第34-40页 |
| ·基因设计，合成及重组质粒的构建 | 第34-37页 |
| ·在摇瓶水平上表达 wt -cgt 和 co -cgt 基因 | 第37-38页 |
| ·E-co -CGT 酶在主要功能上与 wt -CGT 酶保持一致性 | 第38-39页 |
| ·-CGT 酶在发酵罐水平下的分泌表达 | 第39-40页 |
| ·基于密码子优化重组 -CGT 酶在巨大芽孢杆菌表达 | 第40-46页 |
| ·wt -CGT 酶基因在巨大芽孢杆菌中的构建 | 第41-43页 |
| ·重组质粒在巨大芽孢杆菌中的表达 | 第43-44页 |
| ·wt -CGT 酶基因的密码子分析及在巨大芽孢杆菌中的密码子优化 | 第44-45页 |
| ·B-co -CGT 酶基因在巨大芽孢杆菌中的重组质粒构建及表达 | 第45-46页 |
| ·摇瓶及发酵罐初步优化提高重组 -CGT 酶在巨大芽孢杆菌中的表达 | 第46-52页 |
| ·种龄的确定 | 第47页 |
| ·巨大芽孢杆菌生产 B-co -CGT 酶的最佳碳源 | 第47-48页 |
| ·巨大芽孢杆菌生产 B-co -CGT 酶的最佳诱导条件 | 第48-49页 |
| ·分批补料发酵提高 B-co -CGT 酶在巨大芽孢杆菌表达 | 第49-52页 |
| 第四章 结论与展望 | 第52-54页 |
| ·结论 | 第52-53页 |
| ·展望 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-66页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第66页 |
