| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-26页 |
| ·引言 | 第9页 |
| ·脂肪酶概述 | 第9-18页 |
| ·脂肪酶的研究历史简介 | 第9-10页 |
| ·脂肪酶来源 | 第10页 |
| ·脂肪酶的催化特点 | 第10-11页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第11-15页 |
| ·国内外研究现状与发展趋势 | 第15-18页 |
| ·脂肪酶基因的克隆与表达 | 第18-21页 |
| ·微生物脂肪酶的基因特点 | 第18页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第18-21页 |
| ·脂肪酶活力测定方法 | 第21-24页 |
| ·滴定法 | 第21-23页 |
| ·比色法 | 第23页 |
| ·荧光法 | 第23-24页 |
| ·其他方法 | 第24页 |
| ·论文思路及主要内容 | 第24-26页 |
| 第二章 嗜热脂肪地芽孢杆菌脂肪酶基因克隆 | 第26-47页 |
| ·引言 | 第26-29页 |
| ·材料与方法 | 第29-37页 |
| ·菌种、载体及试剂 | 第29-30页 |
| ·主要仪器 | 第30-31页 |
| ·培养基及抗生素 | 第31页 |
| ·DNA提取方法 | 第31-33页 |
| ·PCR扩增 | 第33-34页 |
| ·琼脂糖凝胶核酸电泳及片段回收 | 第34页 |
| ·限制性内切酶双酶切 | 第34页 |
| ·转化 | 第34-35页 |
| ·TA克隆 | 第35-36页 |
| ·重组质粒构建 | 第36-37页 |
| ·结果与讨论 | 第37-46页 |
| ·嗜热脂肪地芽孢杆菌培养 | 第37-38页 |
| ·嗜热脂肪地芽孢杆菌基因组提取 | 第38页 |
| ·嗜热脂肪地芽孢杆菌脂肪酶基因PCR扩增 | 第38-40页 |
| ·感受态细胞制备 | 第40-41页 |
| ·PCR产物TA克隆 | 第41-43页 |
| ·重组质粒构建 | 第43-46页 |
| ·小结 | 第46-47页 |
| 第三章 重组菌表达脂肪酶条件的初步优化研究 | 第47-68页 |
| ·引言 | 第47-49页 |
| ·材料与方法 | 第49-54页 |
| ·菌种、质粒及试剂 | 第49-50页 |
| ·主要仪器 | 第50页 |
| ·培养基、抗生素及诱导剂 | 第50页 |
| ·质粒提取及转化 | 第50页 |
| ·样品预处理 | 第50-51页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第51页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第51-52页 |
| ·脂肪酶活力测定 | 第52-54页 |
| ·表达条件优化方法 | 第54页 |
| ·结果与讨论 | 第54-67页 |
| ·重组质粒转化表达宿主菌 | 第54-56页 |
| ·蛋白质含量标准曲线 | 第56-57页 |
| ·脂肪酶活力测定 | 第57-59页 |
| ·表达条件优化 | 第59-67页 |
| ·小结 | 第67-68页 |
| 第四章 重组嗜热脂肪地芽孢杆菌脂肪酶的酶学性质和影响活性因素的初步研究 | 第68-78页 |
| ·引言 | 第68-69页 |
| ·材料与方法 | 第69-73页 |
| ·菌种及试剂 | 第69页 |
| ·主要仪器 | 第69-70页 |
| ·重组菌培养及样品处理 | 第70页 |
| ·缓冲溶液配制 | 第70-71页 |
| ·pH对重组菌表达的脂肪酶的酶活的影响 | 第71页 |
| ·温度对重组菌表达的脂肪酶的酶活的影响 | 第71-72页 |
| ·重组菌表达的脂肪酶的温度稳定性考察 | 第72页 |
| ·金属离子对重组菌表达的脂肪酶的酶活的影响 | 第72页 |
| ·抑制剂对重组菌表达的脂肪酶的酶活的影响 | 第72-73页 |
| ·结果与讨论 | 第73-76页 |
| ·pH对重组菌表达的脂肪酶的酶活的影响 | 第73页 |
| ·温度对重组菌所表达脂肪酶酶活的影响 | 第73-74页 |
| ·脂肪酶的温度稳定性 | 第74-75页 |
| ·金属离子对酶活的影响 | 第75-76页 |
| ·抑制剂对酶活的影响 | 第76页 |
| ·小结 | 第76-78页 |
| 第五章 结论与展望 | 第78-80页 |
| ·结论 | 第78页 |
| ·展望 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-85页 |
| 致谢 | 第85页 |