| 摘要 | 第1-9页 |
| Summary | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第10-12页 |
| Ⅰ 引言 | 第12-13页 |
| Ⅱ 文献综述 | 第13-30页 |
| 1 马铃薯淀粉的生产和应用现状 | 第13-16页 |
| ·马铃薯淀粉生产概况 | 第13-14页 |
| ·马铃薯淀粉的应用现状 | 第14-16页 |
| ·马铃薯天然淀粉的独特优点 | 第14-15页 |
| ·马铃薯淀粉的应用 | 第15-16页 |
| 2 淀粉的生物合成 | 第16-18页 |
| ·淀粉的组成与结构 | 第16页 |
| ·参与淀粉合成的主要酶 | 第16-17页 |
| ·淀粉生物合成机制 | 第17-18页 |
| 3 淀粉糊化特性及冻融稳定性与淀粉组分的关系 | 第18-19页 |
| 4 基因工程在马铃薯品质改良中的应用 | 第19页 |
| 5 RNA 干扰 | 第19-30页 |
| ·RNA 干扰现象的发现 | 第19-21页 |
| ·RNAi 理论的萌芽 | 第19-20页 |
| ·RNAi 理论的诞生 | 第20-21页 |
| ·RNAi 的作用类型及其机制 | 第21-24页 |
| ·转录水平基因沉默 | 第21-22页 |
| ·转录后水平基因沉默 | 第22-24页 |
| ·RNAi 技术的特点 | 第24-26页 |
| ·普遍性 | 第24页 |
| ·高效性 | 第24-25页 |
| ·特异性 | 第25页 |
| ·可传播性 | 第25页 |
| ·可遗传性 | 第25页 |
| ·扩散性 | 第25页 |
| ·位置效应 | 第25-26页 |
| ·RNAi 技术在作物品质改良中的研究进展 | 第26-29页 |
| ·利用RNAi 调控某一物质含量以提高作物品质 | 第26-28页 |
| ·利用RNAi 提高果实耐贮性 | 第28页 |
| ·利用RNAi 提高抗褐化能力 | 第28-29页 |
| ·利用RNAi 进行代谢调控以获得目的次生代谢物 | 第29页 |
| ·RNAi 技术发展前景 | 第29-30页 |
| Ⅲ 本研究的目的和意义 | 第30-31页 |
| Ⅳ 研究技术路线 | 第31-32页 |
| Ⅴ 试验材料与方法 | 第32-47页 |
| 1 材料 | 第32-33页 |
| ·菌种和质粒 | 第32页 |
| ·植物材料 | 第32页 |
| ·工具酶和试剂 | 第32页 |
| ·培养基 | 第32页 |
| ·细菌培养基 | 第32页 |
| ·植物组织培养基 | 第32页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳缓冲液 | 第32-33页 |
| 2 方法 | 第33-36页 |
| ·DNA 的提取制备 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA 小量碱法提取 | 第33页 |
| ·农杆菌Ti 质粒DNA 碱法小量提取 | 第33-34页 |
| ·植物叶片DNA 的CTAB 法提取 | 第34页 |
| ·感受态细胞的制备及转化 | 第34-36页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| ·对大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第35页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的转化 | 第36页 |
| 3 基因克隆 | 第36-39页 |
| ·融合基因片段的选择 | 第36页 |
| ·引物设计 | 第36页 |
| ·靶标基因片段的扩增及回收 | 第36-37页 |
| ·各靶标基因片段的扩增 | 第36-37页 |
| ·目的片段的回收 | 第37页 |
| ·靶标基因片段的融合及测序 | 第37-39页 |
| ·靶标基因片段的PCR 融合扩增 | 第37-38页 |
| ·靶标基因片段重组克隆子的篮白斑筛选及测序 | 第38-39页 |
| ·gbss 基因5'侧翼序列、patatin 启动子的亚克隆及其与T 载体连接、测序 | 第39页 |
| ·gbss 基因5'侧翼序列、patatin 启动子的亚克隆 | 第39页 |
| ·gbss 基因5'侧翼序列、patatin 启动子与T 载体连接及测序 | 第39页 |
| 4 植物表达载体的构建 | 第39-44页 |
| ·CaMV 35S 启动子驱动的中间干扰载体的构建 | 第39-42页 |
| ·正向目的片段F1 与pHANNIBAL 载体的重组 | 第39-41页 |
| ·反向目的片段F2 与pHF1 载体的重组 | 第41-42页 |
| ·gbss 基因5'侧翼序列与patatin 启动子驱动的中间干扰载体构建 | 第42-43页 |
| ·启动子片段与载体的酶切消化、回收 | 第42页 |
| ·启动子片段与pHF 载体的连接反应 | 第42-43页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞及其筛选 | 第43页 |
| ·重组质粒PCR 及酶切鉴定 | 第43页 |
| ·gbss 基因5'侧翼序列与patatin 启动子驱动的融合基因RNAi 表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·目的片段与载体的酶切消化、回收 | 第43页 |
| ·目的片段与pART27 载体的连接反应 | 第43页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞及其筛选 | 第43页 |
| ·重组质粒的PCR 及酶切鉴定 | 第43-44页 |
| 5 gbss 基因5'侧翼序列与patatin 启动子驱动的融合基因RNAI 表达载体转化农杆菌 | 第44-45页 |
| ·植物表达载体对农杆菌的转化 | 第44页 |
| ·工程农杆菌的PCR 鉴定 | 第44-45页 |
| 6 根癌农杆菌介导法对马铃薯的遗传转化研究 | 第45-46页 |
| ·遗传转化再生体系的建立 | 第45页 |
| ·农杆工程菌转化马铃薯外植体 | 第45-46页 |
| ·马铃薯组培苗的复壮 | 第45页 |
| ·农杆菌工程菌菌液的准备 | 第45页 |
| ·外植体的预培养 | 第45页 |
| ·农杆菌转化外植体的方法 | 第45-46页 |
| 7 转基因马铃薯植株的获得与PCR 鉴定 | 第46-47页 |
| ·转基因马铃薯植株的获得 | 第46页 |
| ·转基因马铃薯植株的PCR 鉴定 | 第46-47页 |
| Ⅵ 结果与分析 | 第47-59页 |
| 1 融合基因片段的选择 | 第47页 |
| ·对三个淀粉合成酶基因cDNA 非同源区段的分析 | 第47页 |
| ·对三个淀粉合成酶基因cDNA 非同源区段的选择 | 第47页 |
| 2 引物设计 | 第47-48页 |
| ·gbss 基因引物 | 第47-48页 |
| ·ssⅢ基因引物 | 第48页 |
| ·ssⅡ基因引物 | 第48页 |
| ·gbss 基因5'侧翼序列引物 | 第48页 |
| ·patatin 启动子引物 | 第48页 |
| 3 靶标基因片段及启动子的扩增 | 第48-49页 |
| ·靶标基因片段的扩增 | 第48-49页 |
| ·启动子的亚克隆 | 第49页 |
| 4 靶标基因片段的融合和测序 | 第49-51页 |
| ·PCR 一步法对靶标基因片段的融合结果 | 第49页 |
| ·靶标基因片段的融合结果 | 第49-50页 |
| ·靶标基因片段的PCR 融合扩增产物的酶切检测 | 第50页 |
| ·融合基因片段测序结果 | 第50-51页 |
| 5 gbss 基因5'侧翼序列、patatin 启动子与T 载体连接、测序 | 第51-54页 |
| 6 中间干扰载体的构建 | 第54-55页 |
| ·CaMV 35S 启动子驱动的中间干扰载体的构建 | 第54页 |
| ·gbss 基因5'侧翼序列、patatin 启动子驱动的融合基因RNAi 中间载体的构建 | 第54-55页 |
| 7 gbss 基因5'侧翼序列和patatin 启动子驱动的融合基因RNAi 载体构建 | 第55-57页 |
| ·gbss 基因5'侧翼序列驱动的融合基因RNAi 载体构建 | 第55-56页 |
| ·patatin 启动子驱动的融合基因RNAi 载体构建 | 第56-57页 |
| 8 农杆菌工程菌的鉴定结果 | 第57页 |
| 9 根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化结果 | 第57-58页 |
| 10 转基因马铃薯植株的PCR 鉴定结果 | 第58-59页 |
| Ⅶ 讨论 | 第59-61页 |
| 1 融合基因的构建 | 第59页 |
| 2 ihpRNA 载体的构建 | 第59-60页 |
| 3 关于马铃薯块茎淀粉糊化品质的研究 | 第60-61页 |
| Ⅷ 结论 | 第61-62页 |
| Ⅸ 参考文献 | 第62-67页 |
| Ⅹ 附图 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 导师简介 | 第69-70页 |
| 作者简介 | 第70-71页 |
