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二穗短柄草的遗传转化及诱导型Ac/Ds转座系统在短柄草中的初步应用

中文摘要第1-9页
英文摘要第9-11页
1 前言第11-27页
   ·二穗短柄草(Brachypodium distachyon)研究现状第11-14页
     ·二穗短柄草的生物学特性第11页
     ·二穗短柄草的基因组学研究第11-13页
     ·二穗短柄草的研究应用第13-14页
       ·在基因鉴定和分离中的应用第13页
       ·二穗短柄草一些重要基因表达模式及其功能研究第13页
       ·二穗短柄草遗传转化第13-14页
       ·二穗短柄草与生物能源第14页
   ·植物转基因技术第14-18页
     ·根癌农杆菌介导的转化法第14-18页
   ·Ac/Ds 转座子系统第18-20页
     ·常见的Ac/Ds 转座标签构建方式第18-19页
       ·Ac 自主转座系统第18页
       ·Ac/Ds 二元系统第18-19页
     ·Ac/Ds 转座子在基因组中的插入特点第19页
       ·连锁效应第19页
       ·插入位点第19页
     ·影响Ds 转座子跳跃的因素第19-20页
   ·诱导系统应用第20-25页
     ·四环素诱导的基因表达系统第22页
     ·糖皮质激素诱导基因表达系统第22-23页
     ·乙醇诱导基因表达系统第23-25页
   ·本研究的目的和意义第25-27页
2 材料和方法第27-40页
   ·植物材料第27-29页
     ·菌株与质粒第27-28页
     ·试剂和药品第28页
     ·PCR 引物第28页
     ·培养基配制第28-29页
   ·方法第29-40页
     ·农杆菌感受态的制备和转化第29-31页
       ·农杆菌化学感受态制备第29页
       ·冻融法转化农杆菌第29页
       ·农杆菌PCR 分析第29-31页
     ·二穗短柄草的遗传转化第31-32页
       ·愈伤组织诱导第31页
       ·农杆菌侵染愈伤组织第31页
       ·通过筛选得到转基因苗第31-32页
     ·短柄草遗传转化体系的优化第32-34页
       ·材料消毒预处理的影响第32页
       ·幼胚的成熟程度与愈伤诱导率的关系第32-33页
       ·幼胚放置方式对于愈伤诱导的影响第33页
       ·不同培养基的选择第33页
       ·2,4-D 浓度对于愈伤诱导率的影响第33页
       ·不同碳源对于组织培养的影响第33页
       ·不同农杆菌菌株对于侵染效果的研究第33页
       ·共培养方式的调整第33页
       ·抗生素种类和浓度的选择第33-34页
     ·绿色荧光蛋白(GFP)基因表达分析第34页
       ·绿色荧光蛋白(GFP)基因瞬时表达分析第34页
       ·绿色荧光蛋白(GFP)基因稳定表达分析第34页
       ·绿色荧光蛋白(GFP)基因在转基因植株中的表达分析第34页
     ·转基因植株的分子鉴定第34-38页
       ·植物总DNA 的提取第34-35页
       ·转基因植物的PCR 鉴定第35页
       ·反向PCR 扩增侧翼序列第35-38页
     ·乙醇诱导系统的研究第38-40页
       ·乙醇诱导处理第38页
       ·植物总RNA 提取(Trizol 法)第38页
       ·反转录cDNA 第一链第38-39页
       ·Ac 转座酶的表达分析第39-40页
3 结果与分析第40-52页
   ·愈伤组织诱导及培养第40页
   ·愈伤组织分化再生和成苗第40-41页
   ·组织培养技术的优化第41-45页
     ·幼胚发育程度对于愈伤诱导的影响第41-43页
     ·消毒前处理对于组织培养的影响第43页
     ·幼胚放置方向对于愈伤诱导的影响第43-44页
     ·不同培养基类型对愈伤组织诱导的影响第44页
     ·不同碳源对于培养愈伤组织的影响第44页
     ·2,4-D 浓度对于愈伤组织诱导的影响第44-45页
   ·农杆菌介导的遗传转化第45-48页
     ·不同侵染方式对于侵染效率的影响第45-46页
     ·不同菌株对侵染效率的影响第46-48页
     ·不同抗生素对于筛选效果的影响第48页
   ·转基因植株的PCR 鉴定第48页
   ·GFP 绿色荧光蛋白的检测第48-50页
   ·T-DNA 插入位点的侧翼序列分析第50-51页
   ·乙醇诱导型Ac/Ds 系统在短柄草中的功能验证第51-52页
4 讨论第52-55页
5 结论第55-56页
参考文献第56-68页
致谢第68页

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