摘要 | 第1-5页 |
Abstract | 第5-8页 |
第一章 前言 | 第8-14页 |
·大菱鲆简介 | 第8-9页 |
·鱼类免疫系统 | 第9-10页 |
·半胱氨酸蛋白酶 | 第10-11页 |
·半胱氨酸蛋白酶抑制剂超家族 | 第11-13页 |
·概述 | 第11页 |
·分类 | 第11-12页 |
·Cystatin 结构域 | 第12页 |
·Cystatin 的功能 | 第12-13页 |
·本研究的目的和意义 | 第13-14页 |
第二章 Cystatin B全长cDNA序列的获得及其生物信息学分析 | 第14-25页 |
·材料和方法 | 第14-21页 |
·实验材料 | 第14-15页 |
·cDNA文库构建前实验动物的处理 | 第15页 |
·大菱鲆cDNA文库的构建 | 第15页 |
·大菱鲆cDNA文库的筛选与Cystatin B基因部分序列的获得 | 第15-16页 |
·大菱鲆 Cystatin B 全长 cDNA 的获得 | 第16-20页 |
·Cystatin B序列的生物信息学分析 | 第20-21页 |
·结果与讨论 | 第21-25页 |
·Cystatin B 全长 cDNA 的获得 | 第21页 |
·SmCytB的序列分析 | 第21-22页 |
·SmCytB的同源性对比和活性位点分析 | 第22-24页 |
·SmCytB蛋白同源物的进化树分析 | 第24-25页 |
第三章 rSmCytB 的克隆、表达纯化和功能分析 | 第25-36页 |
·材料和方法 | 第25-33页 |
·实验材料 | 第25页 |
·SmCytB 基因的克隆 | 第25-28页 |
·SmCytB基因的序列鉴定 | 第28-30页 |
·重组蛋白 rSmCytB 的表达 | 第30-31页 |
·rSmCytB蛋白的纯化 | 第31-32页 |
·rSmCytB蛋白的抑制活性检测 | 第32-33页 |
·结果和讨论 | 第33-36页 |
·SmCytB的克隆 | 第33页 |
·rSmCytB表达和纯化 | 第33-34页 |
·rSmCytB的活性测定 | 第34-36页 |
第四章 大菱鲆半胱氨酸蛋白酶抑制剂SmCytB的功能研究 | 第36-50页 |
·材料和方法 | 第36-45页 |
·实验材料 | 第36-37页 |
·荧光定量实时PCR分析SmCytB在大菱鲆组织中的表达情况 | 第37-39页 |
·细菌刺激后SmCytB 在鱼体组织内表达量变化的分析研究 | 第39-40页 |
·大菱鲆巨噬细胞SmCytB过量表达 | 第40-43页 |
·SmCytB过量表达鉴定 | 第43页 |
·SmCytB过量表达对头肾巨噬细胞杀菌活性的影响 | 第43-44页 |
·SmCytB过量表达对头肾巨噬细胞NO产生的影响 | 第44-45页 |
·结果与讨论 | 第45-50页 |
·SmCytB在大菱鲆中的组织特异性分析 | 第45页 |
·细菌刺激后SmCytB在鱼体组织内表达量变化情况 | 第45-47页 |
·对转染子进行实时荧光定量PCR测定SmCytB的转录水平 | 第47页 |
·免疫印记法(western blot)测定SmCytB蛋白表达 | 第47-48页 |
·SmCytB 过量表达对头肾巨噬细胞杀菌活性的影 | 第48页 |
·SmCytB过量表达对大菱鲆头肾巨噬细胞NO产生的影响 | 第48-50页 |
结论 | 第50-51页 |
参考文献 | 第51-56页 |
附录— 培养基与溶液的配置 | 第56-62页 |
硕士期间发表的文章 | 第62-63页 |
致谢 | 第63页 |