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大菱鲆免疫相关基因cystatin B的克隆表达和功能分析

摘要第1-5页
Abstract第5-8页
第一章 前言第8-14页
   ·大菱鲆简介第8-9页
   ·鱼类免疫系统第9-10页
   ·半胱氨酸蛋白酶第10-11页
   ·半胱氨酸蛋白酶抑制剂超家族第11-13页
     ·概述第11页
     ·分类第11-12页
     ·Cystatin 结构域第12页
     ·Cystatin 的功能第12-13页
   ·本研究的目的和意义第13-14页
第二章 Cystatin B全长cDNA序列的获得及其生物信息学分析第14-25页
   ·材料和方法第14-21页
     ·实验材料第14-15页
     ·cDNA文库构建前实验动物的处理第15页
     ·大菱鲆cDNA文库的构建第15页
     ·大菱鲆cDNA文库的筛选与Cystatin B基因部分序列的获得第15-16页
     ·大菱鲆 Cystatin B 全长 cDNA 的获得第16-20页
     ·Cystatin B序列的生物信息学分析第20-21页
   ·结果与讨论第21-25页
     ·Cystatin B 全长 cDNA 的获得第21页
     ·SmCytB的序列分析第21-22页
     ·SmCytB的同源性对比和活性位点分析第22-24页
     ·SmCytB蛋白同源物的进化树分析第24-25页
第三章 rSmCytB 的克隆、表达纯化和功能分析第25-36页
   ·材料和方法第25-33页
     ·实验材料第25页
     ·SmCytB 基因的克隆第25-28页
     ·SmCytB基因的序列鉴定第28-30页
     ·重组蛋白 rSmCytB 的表达第30-31页
     ·rSmCytB蛋白的纯化第31-32页
     ·rSmCytB蛋白的抑制活性检测第32-33页
   ·结果和讨论第33-36页
     ·SmCytB的克隆第33页
     ·rSmCytB表达和纯化第33-34页
     ·rSmCytB的活性测定第34-36页
第四章 大菱鲆半胱氨酸蛋白酶抑制剂SmCytB的功能研究第36-50页
   ·材料和方法第36-45页
     ·实验材料第36-37页
     ·荧光定量实时PCR分析SmCytB在大菱鲆组织中的表达情况第37-39页
     ·细菌刺激后SmCytB 在鱼体组织内表达量变化的分析研究第39-40页
     ·大菱鲆巨噬细胞SmCytB过量表达第40-43页
     ·SmCytB过量表达鉴定第43页
     ·SmCytB过量表达对头肾巨噬细胞杀菌活性的影响第43-44页
     ·SmCytB过量表达对头肾巨噬细胞NO产生的影响第44-45页
   ·结果与讨论第45-50页
     ·SmCytB在大菱鲆中的组织特异性分析第45页
     ·细菌刺激后SmCytB在鱼体组织内表达量变化情况第45-47页
     ·对转染子进行实时荧光定量PCR测定SmCytB的转录水平第47页
     ·免疫印记法(western blot)测定SmCytB蛋白表达第47-48页
     ·SmCytB 过量表达对头肾巨噬细胞杀菌活性的影第48页
     ·SmCytB过量表达对大菱鲆头肾巨噬细胞NO产生的影响第48-50页
结论第50-51页
参考文献第51-56页
附录— 培养基与溶液的配置第56-62页
硕士期间发表的文章第62-63页
致谢第63页

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