| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 符号说明 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-33页 |
| 1 植物转录因子研究 | 第14-21页 |
| ·植物转录因子的特征与种类 | 第14-18页 |
| ·植物转录因子的研究方法 | 第18-20页 |
| ·植物转录因子基因的克隆 | 第18-19页 |
| ·植物转录因子功能分析方法 | 第19-20页 |
| ·转录因子自身的表达调控 | 第20-21页 |
| 2. 植物MYB转录因子研究进展 | 第21-31页 |
| ·植物中的MYB转录因子的结构特征与分类 | 第22-23页 |
| ·植物MYB转录因子的起源与进化 | 第23-25页 |
| ·植物MYB转录因子的功能 | 第25-31页 |
| ·参与对植物激素的应答 | 第25页 |
| ·控制植物细胞的形态和模式建成 | 第25-26页 |
| ·调控植物类黄酮代谢 | 第26-31页 |
| 3. 立题依据 | 第31-32页 |
| 4. 研究目标与研究内容 | 第32-33页 |
| ·研究目标 | 第32页 |
| ·主要研究内容 | 第32-33页 |
| 第二章 大豆MYB转录因子基因的克隆及其特性分析 | 第33-67页 |
| 1. 前言 | 第33-34页 |
| 2. 材料和方法 | 第34-50页 |
| ·材料 | 第34-36页 |
| ·植物材料培养及取材 | 第34页 |
| ·菌株 | 第34页 |
| ·载体 | 第34页 |
| ·酶与试剂 | 第34页 |
| ·其它试剂 | 第34-35页 |
| ·溶液 | 第35页 |
| ·培养基 | 第35-36页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-50页 |
| ·大豆总RNA的提取(TRNzol) | 第36-37页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第37-38页 |
| ·MYB基因同源片段的克隆 | 第38-40页 |
| ·大豆MYB基因的3'cDNA的克隆 | 第40-41页 |
| ·巢式PCR扩增5'端cDNA | 第41-44页 |
| ·MYB基因cDNA全长扩增 | 第44-45页 |
| ·DNA序列的扩增及分析 | 第45-46页 |
| ·大豆MYB基因在不同组织的表达模式分析 | 第46-48页 |
| ·MYB基因在不同胁迫下的应答 | 第48-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-63页 |
| ·MYB基因同源片段的获得 | 第50页 |
| ·MYB基因cDNA3’序列和5’序列的获得 | 第50页 |
| ·MYB基因cDNA全长序列的获得 | 第50-52页 |
| ·MYB基因cDNA全长序列分析 | 第52-61页 |
| ·MYB基因的序列特征分析及编码蛋白的结构功能预测 | 第52页 |
| ·MYB蛋白的三维空间结构预测 | 第52-53页 |
| ·MYB基因的内含子分析 | 第53页 |
| ·同源性比对及系统进化树分析 | 第53-61页 |
| ·组织特异性表达分析 | 第61页 |
| ·在非生物胁迫下的表达分析 | 第61-63页 |
| 4. 讨论 | 第63-67页 |
| ·利用同源克隆的方法分离克隆大豆MYB基因 | 第63-64页 |
| ·MYB基因的系统进化树分析 | 第64-65页 |
| ·MYB转录因子的组织特异性表达 | 第65页 |
| ·GmMYBZ1、GmMYBZ2、GmMYBJ6和GmMYBJ7的内含子分析 | 第65-66页 |
| ·GmMYBZ1、GmMYBZ2、GmMYBJ6和GmMYBJ7对非生物胁迫的应答 | 第66-67页 |
| 第三章 MYB转录因子转录激活功能的验证 | 第67-82页 |
| 1 前言 | 第67页 |
| 2 材料和方法 | 第67-74页 |
| ·菌株与质粒 | 第67-68页 |
| ·酵母培养基 | 第68-69页 |
| ·酵母表达系统中使用的溶液及缓冲液 | 第69-70页 |
| ·酵母表达 | 第70-74页 |
| ·引物的设计与合成 | 第70页 |
| ·在酵母中表达的效应质粒的构建 | 第70页 |
| ·效应质粒的转化及菌落PCR鉴定 | 第70页 |
| ·效应质粒的小量提取(碱法) | 第70-71页 |
| ·效应质粒的酶切鉴定 | 第71页 |
| ·酵母感受态细胞的制备及转化 | 第71-72页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性滤纸分析 | 第72-73页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性(β-Galactosidase activity)测定 | 第73-74页 |
| 3 结果与分析 | 第74-81页 |
| ·在酵母中融合表达的重组质粒的构建 | 第74-78页 |
| ·重组质粒pBD-GmMYBZI、pBD-GmMYBZ2、pDB-GmMYBJ6和pBD-GmMYBJ7的构建 | 第74-76页 |
| ·重组质粒的菌落PCR鉴定 | 第76-77页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第77页 |
| ·重组质粒的测序分析 | 第77-78页 |
| ·重组质粒的酵母转化 | 第78-79页 |
| ·转化酵母菌株的β-半乳糖苷酶活性检测 | 第79-81页 |
| 4 讨论 | 第81-82页 |
| 第四章 GMMYBZ2、GMMYBJ6和GMMYBJ7转录因子的亚细胞定位 | 第82-93页 |
| 1 前言 | 第82页 |
| 2 材料与方法 | 第82-87页 |
| ·材料 | 第82-84页 |
| ·实验材料 | 第82-83页 |
| ·载体与菌株 | 第83页 |
| ·培养基 | 第83-84页 |
| ·方法 | 第84-87页 |
| ·引物设计与合成 | 第84页 |
| ·GFP融合表达载体的构建 | 第84-85页 |
| ·重组质粒的转化及菌落PCR鉴定 | 第85页 |
| ·重组质粒的小量提取(碱法)及酶切鉴定 | 第85页 |
| ·基因枪法转化洋葱表皮细胞 | 第85-87页 |
| 3 结果与分析 | 第87-91页 |
| ·与绿色荧光蛋白融合表达的重组质粒的构建 | 第87-91页 |
| ·重组质粒p163-GFP-GmMYBZ2、p163-GFP-GmMYBJ6和p163-GFP-GmMYBJ7的构建 | 第87页 |
| ·重组质粒的菌落PCR鉴定 | 第87-91页 |
| ·重组质粒在洋葱表皮细胞中的瞬时表达 | 第91页 |
| 4. 讨论 | 第91-93页 |
| 第五章 大豆MYB基因在烟草中的表达及其相关功能分析 | 第93-113页 |
| 1. 前言 | 第93页 |
| 2. 材料与方法 | 第93-100页 |
| ·材料 | 第93-95页 |
| ·植物材料 | 第93-94页 |
| ·菌株及载体 | 第94页 |
| ·实验中所用试剂与药品 | 第94页 |
| ·培养基 | 第94-95页 |
| ·方法 | 第95-100页 |
| ·引物设计与合成 | 第95页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第95-96页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第96-97页 |
| ·转基因烟草的筛选 | 第97-98页 |
| ·GmMYBZ2、GmMYBJ6和GmMYBJ7对烟草类黄酮代谢的影响 | 第98-99页 |
| ·转基因烟草的耐胁迫分析 | 第99-100页 |
| 3. 实验结果与分析 | 第100-109页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第100页 |
| ·表达载体pCAMBIA2301-GmMYBZ2、pCAMBIA2301-GmMYBJ6和pCAMBIA2301-GmMYBJ7的构建 | 第100页 |
| ·重组质粒的菌落PCR鉴定 | 第100页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第100页 |
| ·含有表达载体的农杆菌PCR检测 | 第100-105页 |
| ·转基因烟草的筛选和鉴定 | 第105页 |
| ·转基因烟草的Gus检测 | 第105页 |
| ·转基因烟草的RT-PCR检测 | 第105页 |
| ·转基因烟草中类黄酮含量及其代谢相关酶的变化 | 第105-106页 |
| ·转基因烟草中类黄酮代谢相关酶的表达分析 | 第105页 |
| ·转基因烟草中总黄酮检测 | 第105-106页 |
| ·转基因烟草对非生物胁迫的耐受分析 | 第106-109页 |
| ·转基因烟草的耐紫外辐射分析 | 第106页 |
| ·转基因烟草的耐盐性分析 | 第106页 |
| ·转基因烟草的耐旱性分析 | 第106-109页 |
| 4. 讨论 | 第109-113页 |
| ·MYB转录因子参与植物类黄酮代谢的调控 | 第109-111页 |
| ·MYB转录因子参与植物的胁迫应答 | 第111页 |
| ·MYB转录因子参与植物器官的形态建成 | 第111-113页 |
| 结论与创新点 | 第113-115页 |
| 1.论文工作取得的确定结果 | 第113-114页 |
| 2.本研究的创新点 | 第114-115页 |
| 参考文献 | 第115-130页 |
| 致谢 | 第130-131页 |
| 攻读学位期间发表文章 | 第131页 |
