| 中文目录 | 第1-8页 |
| 英文目录 | 第8-13页 |
| 中文摘要 | 第13-15页 |
| 英文摘要 | 第15-17页 |
| 第一章 前言 | 第17-59页 |
| ·Axin-多种信号转导通路中的构架蛋白 | 第17-36页 |
| ·引言 | 第17-18页 |
| ·Axin的发现 | 第18-19页 |
| ·Axin的生物学功能 | 第19-21页 |
| ·对体轴发育的调控 | 第19页 |
| ·作为肿瘤抑制因子 | 第19-20页 |
| ·在细胞骨架重排中的作用 | 第20-21页 |
| ·Axin与神经细胞发育 | 第21页 |
| ·Axin与Wnt通路的多个成员相互作用 | 第21-30页 |
| ·APC | 第21-23页 |
| ·GSK-3β | 第23-24页 |
| ·β-catenin | 第24-25页 |
| ·PP2A | 第25-26页 |
| ·Casein Kinases(CK) | 第26-27页 |
| ·Dishevelled和Ccdl | 第27-28页 |
| ·Axam | 第28页 |
| ·LRP | 第28-29页 |
| ·Diversin | 第29页 |
| ·I-mfa | 第29-30页 |
| ·Axin自身的调控 | 第30-31页 |
| ·Axin在Wnt通路中的作用 | 第31页 |
| ·Axin与JNK MAP激酶通路 | 第31-34页 |
| ·Axin与MEKK结合 | 第32页 |
| ·Axin激活JNK需要自身形成同源寡聚体 | 第32页 |
| ·SUMO化酶PIAS参与Axin／JNK途径 | 第32-33页 |
| ·Wnt通路成员对Axin激活JNK的抑制作用 | 第33-34页 |
| ·Axin与其他信号通路 | 第34-35页 |
| ·结语 | 第35-36页 |
| ·MEKK分子研究进展 | 第36-59页 |
| ·引言 | 第36-39页 |
| ·MEKK家族分子 | 第39-40页 |
| ·MEKK调控的信号途径 | 第40-42页 |
| ·MEKK的被调控 | 第42-43页 |
| ·MEKK的其他功能 | 第43-50页 |
| ·调节细胞运动和细胞凋亡 | 第43-44页 |
| ·对NFκB的调控 | 第44-47页 |
| ·对其他转录因子的调控 | 第47-48页 |
| ·MEKK1的其他功能 | 第48页 |
| ·MEKK2，3和4的功能 | 第48-50页 |
| ·MEKK的激活 | 第50-53页 |
| ·MEKK信号的特异性 | 第53-57页 |
| ·结语 | 第57-59页 |
| 第二章 材料和方法 | 第59-80页 |
| ·常用药品和试剂 | 第59页 |
| ·DNA相关实验方法 | 第59-73页 |
| ·质粒载体 | 第59-61页 |
| ·pBluescript SK(-) | 第59-60页 |
| ·pCMV5 | 第60页 |
| ·pSUPER | 第60-61页 |
| ·pGEX | 第61页 |
| ·大肠杆菌(E.coli)感受态细胞的制备和DNA转化 | 第61-62页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第61-62页 |
| ·DNA转化 | 第62页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第62-65页 |
| ·小规模质粒DNA的提取(STET煮沸法) | 第62-63页 |
| ·中等规模质粒DNA的提取 | 第63页 |
| ·大规模质粒DNA的提取(CsCl超速离心法) | 第63-65页 |
| ·质粒DNA的工具酶处理 | 第65-66页 |
| ·DNA的限制性内切酶消化 | 第65页 |
| ·线性DNA的末端平滑化 | 第65页 |
| ·线性DNA5′端的磷酸化 | 第65-66页 |
| ·线性DNA5′端磷酸基团的去除 | 第66页 |
| ·纯化DNA片段 | 第66-67页 |
| ·DNA的琼脂糖电泳 | 第66-67页 |
| ·从琼脂糖凝胶中回收DNA | 第67页 |
| ·从溶液中回收DNA | 第67页 |
| ·DNA连接反应 | 第67页 |
| ·PCR相关实验 | 第67-68页 |
| ·PCR反应 | 第67-68页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第68页 |
| ·哺乳动物细胞表达质粒的构建 | 第68-73页 |
| ·Axin全长表达质粒的构建 | 第68页 |
| ·Axin N系列缺失突变体的构建 | 第68-69页 |
| ·Axin C系列缺失突变体的构建 | 第69页 |
| ·Axin D系列缺失突变体的构建 | 第69-70页 |
| ·Axin M系列缺失突变体的构建 | 第70-71页 |
| ·MEKK2、MEKK3全长表达质粒的构建 | 第71-72页 |
| ·MEKK1、MEKK4 C端表达质粒的构建 | 第72页 |
| ·Ccdl全长及缺失突变体表达质粒的构建 | 第72-73页 |
| ·GSK-3β和CKI表达质粒的构建 | 第73页 |
| ·细菌表达质粒的构建 | 第73页 |
| ·Ccdl-GST融合蛋白表达质粒的构建 | 第73页 |
| ·细胞培养及转染 | 第73-74页 |
| ·细胞培养 | 第73-74页 |
| ·细胞培养液的配制 | 第73-74页 |
| ·细胞的传代和接种 | 第74页 |
| ·瞬时转染 | 第74页 |
| ·蛋白质相关实验方法 | 第74-78页 |
| ·免疫共沉淀 | 第74-75页 |
| ·蛋白质的SDS-PAGE电泳与Western blotting分析 | 第75-76页 |
| ·免疫激酶试验 | 第76-77页 |
| ·Ccdl多克隆抗体的制备 | 第77-78页 |
| ·Ccdl-GST融合蛋白的表达和纯化 | 第77-78页 |
| ·免疫新西兰兔 | 第78页 |
| ·抗体的纯化 | 第78页 |
| ·RNA干扰试验 | 第78-80页 |
| ·RNA干扰试验所用表达质粒的构建 | 第78-79页 |
| ·MEKK4 | 第78-79页 |
| ·Ccdl | 第79页 |
| ·RNA干扰试验 | 第79-80页 |
| 第三章 结果和讨论 | 第80-118页 |
| ·Axin活化JNK激酶可由MEKK4介导 | 第80-104页 |
| ·Axin的MEKK1结合区域缺失突变体仍然能够激活JNK激酶 | 第80-83页 |
| ·Axin的MEKK1结合区域的精细定位 | 第80-81页 |
| ·Axin的MEKK1结合区域缺失突变体的JNK活化能力 | 第81-82页 |
| ·Axin在MEKK1缺失的成纤维细胞中活化JNK激酶 | 第82-83页 |
| ·MEKK4是另一种与Axin结合并介导Axin活化JNK激酶的三级激酶 | 第83-88页 |
| ·Axin与几种三级激酶的结合能力 | 第83-84页 |
| ·Axin的MEKK4结合区域的定位 | 第84-86页 |
| ·MEKK4的显性负作用突变体能抑制Axin活化JNK激酶 | 第86-87页 |
| ·细胞中MEKK1和MEKK4的缺失对Axin活化JNK激酶的影响 | 第87-88页 |
| ·MEKK1和MEKK4竞争性结合Axin | 第88-92页 |
| ·过量表达的MEKK1和MEKK4彼此之间竞争性地与Axin结合 | 第89-91页 |
| ·内源MEKK1和MEKK4对Axin的竞争性结合 | 第91-92页 |
| ·Axin通过MEKK1和MEKK4活化JNK还需要Axin上除已知区域外的另一区域 | 第92-94页 |
| ·Wnt通路成员对MEKK4介导的Axin活化JNK活性的影响 | 第94-98页 |
| ·GSK-3β和CKI在MEKK1~(-/-)MEF细胞中抑制Axin的JNK活化活性 | 第94-95页 |
| ·GSK-3β能干扰MEKK4与Axin的结合 | 第95-96页 |
| ·CKI对MEKK4与Axin结合的干扰 | 第96-97页 |
| ·GSK-3β与MEKK4竞争结合Axin与其激酶活性无关 | 第97页 |
| ·CKI与MEKK4竞争结合Axin与其激酶活性无关 | 第97-98页 |
| ·小结 | 第98-104页 |
| ·Axin能通过三级激酶MEKK4来活化JNK激酶 | 第98-99页 |
| ·MEKK1和MEKK4对Axin的竞争性结合 | 第99-100页 |
| ·Axin可能通过MEKK1和MEKK4接受不同信号刺激来活化JNK激酶 | 第100-101页 |
| ·Axin的功能受到多种结构因素的影响 | 第101-102页 |
| ·Axin与其它MAPK信号通路的构架蛋白的不同之处 | 第102-104页 |
| ·Ccdl对Axin活化JNK的抑制作用及其分子机制 | 第104-118页 |
| ·Axin与Ccdl相互作用的结构基础 | 第104-107页 |
| ·Axin的DIX结构域不能与Ccdl结合 | 第104-106页 |
| ·Axin与Ccdl结合区域的定位 | 第106页 |
| ·Ccdl与Axin结合区域的确定 | 第106-107页 |
| ·Ccdl对Axin活化JNK激酶的影响 | 第107-110页 |
| ·Ccdl对Axin活化JNK激酶的抑制作用 | 第107-108页 |
| ·在pSUPER-MEKK4处理的293T细胞中Ccdl对Axin活化JNK活性的抑制作用 | 第108-110页 |
| ·在MEKK1~(-/-)MEF细胞中Ccdl对Axin活化JNK活性的抑制作用 | 第110页 |
| ·Ccdl抑制Axin活化JNK激酶的分子机制 | 第110-116页 |
| ·Ccdl与MEKK1竞争结合Axin | 第110-112页 |
| ·Ccdl通过coiled-coil结构域与MEKK4结合 | 第112-114页 |
| ·Ccdl通过与MEKK4结合阻止Axin与MEKK4直接结合 | 第114-116页 |
| ·小结 | 第116-118页 |
| ·DIX结构域的功能 | 第116-117页 |
| ·Ccdl抑制Axin活化JNK的分子机制 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 参考文献 | 第119-148页 |
| 图表索引 | 第148-150页 |
| 缩略语及中英文对照 | 第150-154页 |
| 在学期间发表论文 | 第154-158页 |
