交沙霉素生产菌株的菌种选育研究
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-30页 |
| ·交沙霉素的产生菌 | 第12页 |
| ·交沙霉素的基本性质 | 第12-14页 |
| ·交沙霉素的理化性质 | 第12-13页 |
| ·交沙霉素的抗菌活性和特点 | 第13-14页 |
| ·交沙霉素的合成和化学改造 | 第14-17页 |
| ·交沙霉素的全合成 | 第14-16页 |
| ·交沙霉素的生物合成 | 第16页 |
| ·交沙霉素的化学改造 | 第16-17页 |
| ·交沙霉素的作用机理和临床应用 | 第17-20页 |
| ·交沙霉素的作用机理 | 第17页 |
| ·交沙霉素的临床应用 | 第17-20页 |
| ·交沙霉素的定量检测方法 | 第20-24页 |
| ·微生物检定法 | 第20页 |
| ·高效液相色谱法 | 第20-22页 |
| ·分光光度法 | 第22-24页 |
| ·交沙霉素的产销现状 | 第24-25页 |
| ·抗生素产生菌育种的研究 | 第25-29页 |
| ·常规诱变育种 | 第25-26页 |
| ·原生质体技术育种 | 第26-29页 |
| ·本试验研究的目的与意义 | 第29-30页 |
| 2 材料与方法 | 第30-39页 |
| ·试验材料 | 第30-32页 |
| ·供试菌株 | 第30页 |
| ·生产菌株 | 第30页 |
| ·生物测定指示菌 | 第30页 |
| ·培养基 | 第30-31页 |
| ·斜面培养基 | 第30页 |
| ·改良高氏培养基 | 第30页 |
| ·摇瓶种子培养基 | 第30页 |
| ·发酵培养基 | 第30页 |
| ·原生质体再生培养基 | 第30页 |
| ·生物测定培养基 | 第30页 |
| ·琼脂移块法产素专用培养基 | 第30-31页 |
| ·试剂 | 第31-32页 |
| ·参考品 | 第31页 |
| ·酶制剂 | 第31页 |
| ·微量元素溶液 | 第31页 |
| ·TES缓冲液 | 第31页 |
| ·高渗缓冲液(P缓冲液) | 第31页 |
| ·溶菌酶缓冲液 | 第31页 |
| ·DNS溶液 | 第31页 |
| ·硝普钠 | 第31页 |
| ·碱液 | 第31-32页 |
| ·试验仪器 | 第32页 |
| ·试验方法 | 第32-35页 |
| ·培养条件 | 第32页 |
| ·斜面菌种培养条件 | 第32页 |
| ·摇瓶种子培养条件 | 第32页 |
| ·发酵条件 | 第32页 |
| ·原生质体再生培养条件 | 第32页 |
| ·分析方法 | 第32-34页 |
| ·生物效价的测定 | 第32-33页 |
| ·化学效价的测定 | 第33页 |
| ·菌丝量的测定 | 第33页 |
| ·发酵液中还原糖和总糖浓度的测定 | 第33页 |
| ·发酵液中NH_4~+态氮浓度的测定 | 第33-34页 |
| ·发酵液滤速的测定 | 第34页 |
| ·初筛(琼脂移块法) | 第34页 |
| ·复筛(摇瓶发酵) | 第34页 |
| ·终筛( HPLC法) | 第34页 |
| ·诱变处理方法 | 第34-35页 |
| ·斜面菌种的制备 | 第34-35页 |
| ·孢子悬液的制备 | 第35页 |
| ·幼嫩菌丝体悬液的制备 | 第35页 |
| ·原生质体悬液的制备 | 第35页 |
| ·原生质体再生率的计算 | 第35页 |
| ·高产菌株的选育 | 第35-37页 |
| ·出发菌株的选择 | 第35-36页 |
| ·紫外线-氯化锂复合诱变 | 第36页 |
| ·~(60)Co-γ射线辐射诱变 | 第36页 |
| ·原生质体再生菌株筛选 | 第36页 |
| ·原生质体-紫外复合诱变 | 第36-37页 |
| ·原生质体融合 | 第37页 |
| ·原生质体单亲本紫外灭活 | 第37页 |
| ·原生质体双亲本融合 | 第37页 |
| ·发酵培养基的优化 | 第37-38页 |
| ·Placket-Burman设计 | 第37页 |
| ·最陡爬坡试验 | 第37页 |
| ·中心组合设计和响应面分析 | 第37-38页 |
| ·验证性试验 | 第38页 |
| ·菌株发酵参数的测定 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-62页 |
| ·交沙霉素生物测定方法研究的结果 | 第39-41页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第39-40页 |
| ·发酵液浸提溶剂的选择 | 第40-41页 |
| ·初筛营养菌块的贴放方法的确定 | 第41页 |
| ·出发菌株的选择 | 第41-42页 |
| ·预萌发孢子悬液的氯化锂-紫外诱变 | 第42-44页 |
| ·紫外线照射不同时间的诱变效果比较 | 第42-43页 |
| ·硫酸链霉素最小抑制浓度的确定 | 第43页 |
| ·紫外诱变菌株的筛选 | 第43-44页 |
| ·~(60)Co-γ射线对菌株UV90的诱变 | 第44页 |
| ·不同辐照剂量下的诱变效果比较 | 第44页 |
| ·~(60)Co-γ射线诱变菌株复筛 | 第44页 |
| ·原生质体技术 | 第44-52页 |
| ·出发菌株的复壮 | 第45页 |
| ·原生质体的制备和再生 | 第45-48页 |
| ·交沙霉素产生菌的菌丝生长曲线 | 第45-46页 |
| ·溶菌酶量对原生质体形成和再生的影响 | 第46-47页 |
| ·酶解时间及温度对原生质体形成和再生的影响 | 第47-48页 |
| ·原生质体再生菌株的筛选 | 第48-49页 |
| ·原生质体再生菌落初筛突变频率分布统计 | 第48-49页 |
| ·原生质体再生菌株的复筛 | 第49页 |
| ·原生质体紫外诱变菌株的筛选 | 第49-51页 |
| ·不同诱变剂量下的诱变效果比较 | 第49-50页 |
| ·原生质体紫外诱变初筛突变频率分布统计 | 第50-51页 |
| ·原生质体紫外诱变菌株的复筛 | 第51页 |
| ·原生质体融合筛选 | 第51-52页 |
| ·融合亲本的选择 | 第51页 |
| ·紫外灭活剂量的确定 | 第51-52页 |
| ·融合子的计算 | 第52页 |
| ·原生质体融合后再生菌落的筛选 | 第52页 |
| ·传代稳定性试验 | 第52-54页 |
| ·发酵培养基的优化 | 第54-57页 |
| ·Pluekett-Burman试验设计结果 | 第54-55页 |
| ·最陡爬坡试验结果 | 第55页 |
| ·中心组合设计及响应面试验设计结果 | 第55-57页 |
| ·验证性试验结果 | 第57页 |
| ·菌株JM8和R29发酵代谢曲线的测定 | 第57-62页 |
| ·葡萄糖溶液吸光度标准曲线的制定 | 第57-58页 |
| ·NH_4~+吸光度标准曲线的制定 | 第58-59页 |
| ·发酵过程中代谢曲线测定结果 | 第59-62页 |
| ·原始出发菌株发酵代谢曲线的初步测定 | 第59-60页 |
| ·诱变菌株发酵代谢曲线的测定 | 第60-62页 |
| 4 讨论 | 第62-64页 |
| ·快速筛选方法的建立 | 第62页 |
| ·传统诱变方法和原生质体技术诱变方法的比较 | 第62页 |
| ·原生质体技术育种的研究 | 第62-63页 |
| ·发酵条件优化的研究 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
