环介导等温扩增同时检测沙门菌和志贺菌的研究
| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 缩略语表 | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-35页 |
| 1 食品安全与食源性病原菌 | 第16-17页 |
| 2 本研究涉及的食源性病原菌 | 第17-20页 |
| ·沙门菌(Salmonella spp.) | 第18-19页 |
| ·病原学特性 | 第18页 |
| ·流行病学 | 第18页 |
| ·致病机理和临床症状 | 第18-19页 |
| ·志贺菌(Shigella spp.) | 第19-20页 |
| ·病原学特性 | 第19页 |
| ·流行病学 | 第19-20页 |
| ·致病机理 | 第20页 |
| 3 食源性病原菌检测技术的研究进展 | 第20-34页 |
| ·利用微生物特征酶的快速检测方法 | 第20-21页 |
| ·免疫学检测技术 | 第21-22页 |
| ·免疫凝集反应 | 第21页 |
| ·标记免疫学技术 | 第21-22页 |
| ·免疫沉淀反应 | 第22页 |
| ·分子生物学检测技术 | 第22-34页 |
| ·核酸探针检测技术 | 第22-23页 |
| ·聚合酶链式反应技术 | 第23-25页 |
| ·其它核酸扩增方法 | 第25-26页 |
| ·环介导等温扩增 | 第26-34页 |
| 4 本研究的目的及意义 | 第34-35页 |
| 第二章 沙门菌的LAMP引物设计及特异性分析 | 第35-50页 |
| 1 材料 | 第35-37页 |
| ·菌株 | 第35-36页 |
| ·试剂 | 第36-37页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·几种试剂的配制 | 第36-37页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| 2 方法 | 第37-40页 |
| ·细菌DNA提取 | 第37页 |
| ·DNA浓度测定 | 第37-38页 |
| ·LAMP扩增靶基因的选择 | 第38页 |
| ·LAMP引物设计 | 第38页 |
| ·LAMP反应条件优化及敏感性实验 | 第38-39页 |
| ·LAMP反应条件优化 | 第38-39页 |
| ·环引物对LAMP反应时间的影响 | 第39页 |
| ·LAMP敏感性实验 | 第39页 |
| ·LAMP产物电泳检测 | 第39页 |
| ·LAMP引物特异性实验 | 第39页 |
| ·PCR敏感性实验 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-49页 |
| ·细菌DNA提取 | 第40页 |
| ·LAMP靶基因的选择 | 第40-41页 |
| ·LAMP引物设计原则 | 第41-42页 |
| ·引物设计 | 第42-43页 |
| ·用于引物设计的核酸序列的选择 | 第42页 |
| ·引物设计 | 第42-43页 |
| ·沙门菌LAMP反应条件的优化 | 第43-46页 |
| ·反应温度对LAMP的影响 | 第43-44页 |
| ·Mg~(2+)对LAMP的影响 | 第44页 |
| ·dNTP浓度对LAMP的影响 | 第44-45页 |
| ·反应时间对LAMP的影响 | 第45-46页 |
| ·环引物对LAMP反应时间的影响 | 第46页 |
| ·LAMP反应检测沙门菌DNA的敏感性分析 | 第46-47页 |
| ·引物的特异性分析 | 第47-48页 |
| ·PCR反应检测沙门菌DNA的敏感性分析 | 第48-49页 |
| 4 小结与讨论 | 第49-50页 |
| 第三章 志贺菌的LAMP引物设计及特异性分析 | 第50-60页 |
| 1 材料 | 第50页 |
| ·菌株 | 第50页 |
| ·试剂 | 第50页 |
| ·主要仪器 | 第50页 |
| 2 方法 | 第50-52页 |
| ·细菌DNA提取 | 第50页 |
| ·DNA浓度测定 | 第50-51页 |
| ·LAMP扩增靶基因的选择 | 第51页 |
| ·LAMP引物设计 | 第51页 |
| ·LAMP反应条件优化及敏感性实验 | 第51-52页 |
| ·LAMP反应条件优化 | 第51页 |
| ·环引物对LAMP反应时间的影响 | 第51-52页 |
| ·LAMP敏感性实验 | 第52页 |
| ·LAMP产物电泳检测 | 第52页 |
| ·LAMP引物特异性实验 | 第52页 |
| ·PCR敏感性实验 | 第52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-59页 |
| ·细菌DNA提取 | 第52页 |
| ·LAMP靶基因的选择 | 第52-53页 |
| ·引物设计 | 第53-54页 |
| ·用于引物设计的核酸序列的选择 | 第53页 |
| ·引物设计 | 第53-54页 |
| ·志贺菌LAMP反应条件的优化 | 第54-56页 |
| ·LAMP反应检测志贺菌DNA的敏感性分析 | 第56-57页 |
| ·引物的特异性分析 | 第57-58页 |
| ·PCR反应检测志贺菌DNA的敏感性分析 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-60页 |
| 第四章 沙门菌和志贺菌的双重LAMP检测 | 第60-69页 |
| 1 材料 | 第60页 |
| ·菌株 | 第60页 |
| ·试剂 | 第60页 |
| ·主要仪器 | 第60页 |
| 2 方法 | 第60-63页 |
| ·样品制备 | 第60页 |
| ·细菌DNA提取 | 第60-61页 |
| ·DNA浓度测定 | 第61页 |
| ·双重LAMP反应条件优化 | 第61页 |
| ·LAMP产物电泳检测 | 第61-62页 |
| ·双重LAMP敏感性实验 | 第62页 |
| ·双重LAMP特异性实验 | 第62页 |
| ·双重PCR敏感度实验 | 第62页 |
| ·双重LAMP检测人为接种病原菌的牛奶样品 | 第62-63页 |
| ·富集增菌 | 第62页 |
| ·反应模板制备 | 第62-63页 |
| ·双重LAMP检测 | 第63页 |
| ·病原菌的国标检测方法 | 第63页 |
| 3 结果与分析 | 第63-68页 |
| ·双重LAMP反应条件优化 | 第63-64页 |
| ·双重LAMP敏感性分析 | 第64-65页 |
| ·双重LAMP引物的特异性分析 | 第65-66页 |
| ·双重PCR反应的敏感性分析 | 第66-67页 |
| ·人为接种病原菌牛奶样品的双重LAMP检测敏感性 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-69页 |
| 总结与展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 附录 读研期间发表的论文 | 第78页 |
