| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第9-14页 |
| 1. 鸡传染性法氏囊病毒的生物学特性 | 第9-10页 |
| 2. 病毒细胞受体及感染相关分子 | 第10-11页 |
| ·病毒受体及感染相关分子的研究意义 | 第10-11页 |
| ·病毒细胞受体及感染相关分子研究的复杂性 | 第11页 |
| 3.IBDV 细胞受体的研究进展 | 第11-14页 |
| ·致病性IBDV 主要感染SIgM 阳性B 淋巴细胞 | 第11-12页 |
| ·IBDV 感染不需要鸡B 淋巴细胞表面特异性抗原Bu-1 介导 | 第12页 |
| ·CEF 和鸡B 淋巴细胞表面IBDV 受体的分布 | 第12页 |
| ·IBDV 受体在Vero 细胞表面的分布 | 第12页 |
| ·IBDV 受体是N-连接糖基化的蛋白质 | 第12-14页 |
| 引言 | 第14-16页 |
| 第一章 鸡胚成纤维细胞cDNA 真核表达文库的构建及鉴定 | 第16-21页 |
| 1. 材料与方法 | 第16-18页 |
| ·材料、质粒和菌株 | 第16页 |
| ·方法 | 第16-18页 |
| ·CEF 的制备和mRNA 提取 | 第16-17页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第17页 |
| ·cDNA 双链的合成 | 第17页 |
| ·cDNA 与接头连接 | 第17页 |
| ·cDNA 双链酶切消化和分级分离 | 第17-18页 |
| ·cDNA 克隆到p~(AP311eo) 载体 | 第18页 |
| ·重组质粒点转转化E.coli strain DH108 | 第18页 |
| ·文库质量评价 | 第18页 |
| 2. 结果 | 第18-19页 |
| ·鸡胚成纤维细胞mRNA 的提取 | 第18页 |
| ·初始文库的容量大小和插入片段大小的分析 | 第18-19页 |
| 3. 讨论 | 第19-20页 |
| 4. 小结 | 第20-21页 |
| 第二章 高效电转化感受态细胞E.coli strain DH108 的制备方法研究 | 第21-27页 |
| 1. 材料与方法 | 第21-23页 |
| ·材料 | 第21-22页 |
| ·菌种和质粒 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21页 |
| ·试剂的配制及保存方法 | 第21-22页 |
| ·仪器与设备 | 第22页 |
| ·优化方法步骤 | 第22-23页 |
| ·准备工作 | 第22页 |
| ·确定生长阶段和最后重悬体积与细胞密度及转化效率的关系 | 第22-23页 |
| ·洗液对转化效率的影响 | 第23页 |
| ·电击参数的设置比较 | 第23页 |
| ·用某些化学试剂处理细胞对转化效率的影响 | 第23页 |
| 2. 结果 | 第23-25页 |
| ·生长阶段和细胞重悬体积优化 | 第23页 |
| ·电场强度的优化 | 第23-24页 |
| ·洗液、DTT 和DL-threonine 等化学试剂对转化效率的影响 | 第24页 |
| ·最佳方法步骤 | 第24-25页 |
| 3. 讨论 | 第25-26页 |
| 4. 小结 | 第26-27页 |
| 第三章 抑制IBDV 感染CEF 的单克隆抗体的筛选方法的建立 | 第27-34页 |
| 1. 材料 | 第27-28页 |
| ·细胞和病毒 | 第27页 |
| ·培养基及其它试剂 | 第27-28页 |
| 2. 方法 | 第28-29页 |
| ·CEF 细胞的制备和IBDV 的培养 | 第28页 |
| ·免疫组化试验中接毒量和接毒时间的优化 | 第28页 |
| ·抗IBDV 的MAb F22EA6 的初步提纯和Biotin 标记 | 第28页 |
| ·F22EA6-Biotin 在免疫组化中的工作浓度确定 | 第28页 |
| ·筛选系统效果评价 | 第28-29页 |
| 3. 结果 | 第29-32页 |
| ·免疫组化试验中接毒量和接毒时间的优化 | 第29-30页 |
| ·F22EA6 的初步提纯和Biotin 标记 | 第30页 |
| ·F22EA6-Biotin 在免疫组化中的工作浓度 | 第30页 |
| ·筛选系统效果评价 | 第30-31页 |
| ·抑制IBDV 感染CEF 的MAb 的筛选方法步骤 | 第31-32页 |
| 4. 讨论 | 第32-33页 |
| 5. 小结 | 第33-34页 |
| 第四章 抑制IBDV 感染CEF 的单克隆抗体的制备及部分功能鉴定 | 第34-44页 |
| 1. 材料 | 第35-36页 |
| ·细胞和病毒 | 第35页 |
| ·培养基及其它试剂 | 第35页 |
| ·单克隆抗体制备所需溶液 | 第35-36页 |
| ·试验动物 | 第36页 |
| 2. 方法 | 第36-39页 |
| ·免疫原的制备和免疫方法 | 第36-37页 |
| ·总抗体效价和阻断IBDV 感染的效果测定与比较 | 第37页 |
| ·抑制IBDV 感染的mAb 杂交瘤细胞株的建立 | 第37-39页 |
| ·细胞融合所用小鼠的选择 | 第37页 |
| ·细胞融合与阳性杂交瘤细胞株的筛选 | 第37-39页 |
| ·N50 骨髓瘤细胞的准备 | 第37-38页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第38页 |
| ·融合细胞的培养 | 第38页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第38页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的克隆 | 第38-39页 |
| ·抑制IBDV 感染的m Ab 的生产 | 第39页 |
| ·体外培养 | 第39页 |
| ·体内诱生腹水 | 第39页 |
| ·上清稀释后的梯度抑制试验 | 第39页 |
| ·用该 mAb 对 CEF 进行表面染色 | 第39页 |
| ·流式细胞仪检测 mAb 与 CEF 表面分子的结合 | 第39页 |
| 3.结果 | 第39-41页 |
| ·总抗体效价和阻断 IBDV 感染的效果测定与比较 | 第39-40页 |
| ·抑制 IBDV 感染的 mAb 杂交瘤细胞株的筛选 | 第40页 |
| ·38-1 上清稀释后梯度抑制感染试验 | 第40-41页 |
| ·用该 mAb 对 CEF 进行表面染色 | 第41页 |
| ·流式细胞仪检测抗体与 CEF 表面分子的结合 | 第41页 |
| 4.讨论 | 第41-43页 |
| 5.小结 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-50页 |
| 英文摘要 | 第50-51页 |
