| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| 文献综述 | 第8-22页 |
| 1 猪圆环病毒的研究进展 | 第8-20页 |
| ·猪圆环病毒的病原学概述 | 第8-9页 |
| ·PCV 的分子生物学特 | 第9-12页 |
| ·流行病学 | 第12-14页 |
| ·PCV-2 诊断技术研究进展 | 第14-20页 |
| 2 研究的目的和意义 | 第20页 |
| 3 论文设计及技术路线 | 第20-22页 |
| 试验一、PCV-2 ORF2 主要抗原区基因的克隆及序列分析 | 第22-33页 |
| 1 材料 | 第22-30页 |
| ·仪器设备 | 第22页 |
| ·主要试剂盒及常用溶液的配制 | 第22-23页 |
| ·菌种及质粒 | 第23-24页 |
| ·PCV-2 病毒基因组的提取 | 第24-25页 |
| ·引物的设计 | 第25页 |
| ·目的片段的PCR 扩增及及产物的回收纯化 | 第25-27页 |
| ·重组质粒的构建 | 第27-28页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第28-29页 |
| ·目的基因的序列测定 | 第29-30页 |
| 2 结果与分析 | 第30-32页 |
| ·ORF2 主要抗原区基因的PCR 扩增克隆 | 第30页 |
| ·ORF2 主要抗原区基因的序列测定与分析结果 | 第30-32页 |
| 3 结论与讨论 | 第32-33页 |
| ·目的基因的扩增与克隆 | 第32页 |
| ·ORF2 编码蛋白的一级结构的分析 | 第32-33页 |
| 试验二、PCV-2 ORF2 主要抗原域基因在大肠杆菌中的表达 | 第33-46页 |
| 1 材料与方法 | 第33-40页 |
| ·仪器设备 | 第33页 |
| ·溶液配制 | 第33-34页 |
| ·菌株与质粒 | 第34-35页 |
| ·酶和试剂 | 第35页 |
| ·PCV-2 ORF2 表达区重组质粒(pMD-EXP)的构建 | 第35-37页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·重组表达菌的诱导表达 | 第38页 |
| ·重组表达产物的鉴定 | 第38-40页 |
| 2 结果与分析 | 第40-44页 |
| ·克隆质粒pMD-EXP 的构建 | 第40-41页 |
| ·重组表达菌pET-EXP 的鉴定 | 第41-43页 |
| ·PCV-2 ORF2 主要抗原域基因的诱导及表达产物的检测 | 第43-44页 |
| 3 结论与讨论 | 第44-45页 |
| ·pMD-EXP 重组质粒的构建 | 第44页 |
| ·重组工程菌的表达及SDS-PAGE 电泳 | 第44-45页 |
| ·Western-blotting 分析 | 第45页 |
| 4 小结 | 第45-46页 |
| 试验三、 PCV ORF2 主要抗原域蛋白的变性、复性的研究 | 第46-50页 |
| 1 材料与方法 | 第46-47页 |
| ·仪器设备 | 第46页 |
| ·试剂 | 第46页 |
| ·处理包涵体所用试剂的配制 | 第46页 |
| ·重组工程菌的制备 | 第46页 |
| ·包涵体的制备与蛋白质的变性溶解 | 第46-47页 |
| ·重组蛋白的复性 | 第47页 |
| ·复性蛋白浓度和免疫活性的测定 | 第47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-49页 |
| ·包涵体的分离 | 第47页 |
| ·包涵体的变性 | 第47页 |
| ·包涵体的复性 | 第47-48页 |
| ·复性蛋白的浓度和免疫活性的测定 | 第48-49页 |
| 3 结论与讨论 | 第49-50页 |
| ·包涵体的处理 | 第49页 |
| ·包涵体的变性溶解 | 第49页 |
| ·蛋白的复性 | 第49-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 英文摘要 | 第58-59页 |
