| 致谢 | 第1-11页 |
| 摘要 | 第11-12页 |
| 文献综述 | 第12-28页 |
| 1 白细胞介素-2 的研究概况 | 第12-18页 |
| ·IL-2 的发现 | 第12页 |
| ·IL-2 的产生 | 第12-13页 |
| ·IL-2 的分子结构 | 第13-14页 |
| ·IL-2 的受体及其特性 | 第14页 |
| ·IL-2 的克隆与体外重组 | 第14-15页 |
| ·IL-2 的生物学活性 | 第15-16页 |
| ·诱导T 淋巴细胞的增殖与分化 | 第15-16页 |
| ·诱导NK、LAK 细胞增殖 | 第16页 |
| ·对B 细胞和巨噬细胞的作用 | 第16页 |
| ·IL-2 的应用 | 第16-18页 |
| ·作为免疫治疗剂 | 第16-17页 |
| ·作为免疫增强剂 | 第17页 |
| ·构建新型重组基因工程疫苗 | 第17-18页 |
| ·作为临床诊断指标 | 第18页 |
| 2 杆状病毒表达系统的研究概况 | 第18-28页 |
| ·杆状病毒的分类 | 第18-19页 |
| ·杆状病毒的结构 | 第19-20页 |
| ·杆状病毒表达系统的基本原理 | 第20页 |
| ·杆状病毒转移载体的种类及启动子 | 第20-21页 |
| ·非融合型和融合型转移载体 | 第20-21页 |
| ·单元和多元表达载体 | 第21页 |
| ·转移载体的启动子 | 第21页 |
| ·杆状病毒表达系统的构建策略 | 第21-24页 |
| ·NPV DNA 线性化技术 | 第21-22页 |
| ·绿色荧光蛋白反向筛选标记系统 | 第22页 |
| ·酵母-昆虫细胞穿梭载体筛选体系 | 第22页 |
| ·大肠杆菌E.coli-昆虫细胞的穿梭载体筛选系统 | 第22-24页 |
| ·杆状病毒-S2 系统 | 第24页 |
| ·其他重组方法 | 第24页 |
| ·杆状病毒表达系统的优越性 | 第24-25页 |
| ·高效表达外源基因 | 第24-25页 |
| ·可容纳较大的外源DNA 片段 | 第25页 |
| ·表达产物后加工完善，活性高 | 第25页 |
| ·安全性好 | 第25页 |
| ·适合表达细胞毒性蛋白 | 第25页 |
| ·阳性克隆筛选方便 | 第25页 |
| ·影响外源基因表达水平的因素 | 第25-27页 |
| ·宿主因素 | 第26页 |
| ·外源基因及其编码产物的特性 | 第26页 |
| ·启动子类型 | 第26页 |
| ·启动子序列完整性 | 第26-27页 |
| ·其他因素 | 第27页 |
| ·杆状病毒表达系统的应用前景 | 第27-28页 |
| 引言 | 第28-29页 |
| 试验一 淮南猪IL-2 全基因的克隆与遗传进化分析 | 第29-39页 |
| 1 材料和方法 | 第29-33页 |
| ·供试材料 | 第29页 |
| ·试验动物 | 第29页 |
| ·菌种和质粒 | 第29页 |
| ·基因克隆相关试剂 | 第29页 |
| ·试剂盒 | 第29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·试验方法 | 第29-33页 |
| ·引物设计与合成 | 第29页 |
| ·淮南猪脾淋巴细胞总RNA 的提取 | 第29-30页 |
| ·淮南猪IL-2 全基因的RT-PCR 扩增 | 第30-31页 |
| ·PCR 产物的回收纯化 | 第31页 |
| ·PCR 产物的连接 | 第31页 |
| ·连接产物的转化 | 第31-32页 |
| ·挑斑 | 第32页 |
| ·质粒提取 | 第32页 |
| ·克隆鉴定 | 第32-33页 |
| 2 结果 | 第33-37页 |
| ·淮南猪IL-2 全基因的RT-PCR 扩增 | 第33页 |
| ·淮南猪IL-2 基因的克隆及鉴定 | 第33-35页 |
| ·淮南猪IL-2 基因序列测定及分析 | 第35-36页 |
| ·淮南猪IL-2基因与其他猪品种及不同动物的IL-2基因核苷酸序列同源性比较及系统进化分析 | 第36-37页 |
| 3 结论与讨论 | 第37-39页 |
| ·关于淋巴细胞的提取及诱导培养 | 第37页 |
| ·关于pIL-2 的RT-PCR 扩增 | 第37-38页 |
| ·关于pIL-2 基因的序列分析 | 第38-39页 |
| 试验二 淮南猪IL-2 基因在大肠杆菌中的表达及生物学活性测定 | 第39-51页 |
| 1 材料与方法 | 第39-44页 |
| ·供试材料 | 第39页 |
| ·菌种和质粒 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·试剂盒 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·试验方法 | 第39-44页 |
| ·目的片段的制备 | 第39-40页 |
| ·引物设计 | 第39页 |
| ·pIL-2 成熟蛋白基因的PCR 扩增与纯化回收 | 第39-40页 |
| ·目的片段的酶切回收 | 第40页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·表达载体的纯化与扩增 | 第40页 |
| ·表达载体的质粒提取 | 第40页 |
| ·表达质粒的酶切回收 | 第40页 |
| ·目的片段与表达质粒的连接 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的转化和筛选 | 第41页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组表达质粒的提取 | 第41页 |
| ·重组表达质粒的PCR 鉴定 | 第41页 |
| ·重组表达质粒的酶切鉴定 | 第41页 |
| ·重组表达质粒的序列测定 | 第41-42页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达 | 第42页 |
| ·重组表达蛋白的SDS-PAGE 电泳 | 第42页 |
| ·重组表达蛋白的Western blot 分析 | 第42-43页 |
| ·表达蛋白的纯化与复性 | 第43-44页 |
| ·表达蛋白的生物学活性测定 | 第44页 |
| 2 结果 | 第44-48页 |
| ·淮南猪IL-2 成熟蛋白基因的扩增 | 第44页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·重组表达载体的鉴定 | 第45-46页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE 检测 | 第46-47页 |
| ·表达蛋白的Western blot 分析 | 第47-48页 |
| ·表达蛋白的纯化及复性 | 第48页 |
| ·表达蛋白的生物学活性测定 | 第48页 |
| 3 结论与讨论 | 第48-51页 |
| ·关于原核表达载体的选择 | 第48-49页 |
| ·关于表达条件的优化 | 第49页 |
| ·关于表达蛋白的纯化与复性 | 第49-50页 |
| ·关于重组pIL-2 生物学活性的测定 | 第50-51页 |
| 试验三 淮南猪IL-2 基因在昆虫细胞中的表达及生物学活性测定 | 第51-66页 |
| 1 材料与方法 | 第51-58页 |
| ·供试材料 | 第51页 |
| ·菌种和质粒 | 第51页 |
| ·细胞与培养基 | 第51页 |
| ·主要试剂 | 第51页 |
| ·试剂盒 | 第51页 |
| ·主要仪器 | 第51页 |
| ·试验方法 | 第51-58页 |
| ·目的片段的制备 | 第51-52页 |
| ·引物设计 | 第51-52页 |
| ·pIL-2 成熟蛋白基因的PCR 扩增与纯化回收 | 第52页 |
| ·目的片段的酶切回收 | 第52页 |
| ·重组转座载体的构建 | 第52-53页 |
| ·转座载体的纯化与扩增 | 第52页 |
| ·转座载体的质粒提取 | 第52页 |
| ·转座载体质粒的酶切回收 | 第52-53页 |
| ·目的片段与转座载体质粒的连接 | 第53页 |
| ·重组质粒的转化和筛选 | 第53页 |
| ·重组转座载体的鉴定 | 第53-54页 |
| ·重组转座载体质粒的提取 | 第53页 |
| ·重组转座载体质粒的PCR 鉴定 | 第53页 |
| ·重组转座载体质粒的酶切鉴定 | 第53-54页 |
| ·重组转座载体质粒的序列测定 | 第54页 |
| ·重组穿梭载体的构建 | 第54页 |
| ·DH10Bac 感受态细胞的制备 | 第54页 |
| ·位点特异性转座 | 第54页 |
| ·重组穿梭载体的鉴定 | 第54-55页 |
| ·重组穿梭载体阳性克隆的筛选 | 第54-55页 |
| ·重组穿梭载体质粒的提取 | 第55页 |
| ·重组穿梭载体的PCR 鉴定 | 第55页 |
| ·重组杆状病毒的获得及鉴定 | 第55-56页 |
| ·转染Sf9 昆虫细胞获得P1 代病毒 | 第55-56页 |
| ·P2 代及P3 代重组病毒的扩增 | 第56页 |
| ·重组杆状病毒DNA 的提取与PCR 鉴定 | 第56页 |
| ·间接免疫荧光检测猪IL-2 基因的表达 | 第56-57页 |
| ·重组表达蛋白的SDS-PAGE 电泳 | 第57页 |
| ·重组表达蛋白的Western blot 分析 | 第57页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第57-58页 |
| ·样品的处理 | 第57页 |
| ·过柱纯化 | 第57-58页 |
| ·表达蛋白的生物学活性测定 | 第58页 |
| 2 结果 | 第58-63页 |
| ·淮南猪IL-2 成熟蛋白基因的扩增 | 第58页 |
| ·重组转座载体的鉴定 | 第58-59页 |
| ·重组穿梭载体的鉴定 | 第59-60页 |
| ·转染后细胞形态学变化与PCR 检测 | 第60页 |
| ·表达产物的间接免疫荧光检测 | 第60-61页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE 和Western-blot 检测 | 第61-62页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第62页 |
| ·表达蛋白的生物学活性测定 | 第62-63页 |
| 3 讨论 | 第63-66页 |
| 全文总结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-77页 |
| 英文摘要 | 第77-79页 |
| 硕士期间主要发表论文 | 第79页 |
