| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 文献综述 | 第11-27页 |
| 第一章 反向遗传学技术在流感病毒拯救中的应用 | 第11-22页 |
| ·A 型流感病毒及其基因组特征 | 第11-13页 |
| ·反向遗传学技术在反义RNA 病毒中应用的回顾 | 第13页 |
| ·反向遗传学技术在流感病毒中的应用的回顾 | 第13-19页 |
| ·以辅助流感病毒为基础的反向遗传操作系统 | 第13-14页 |
| ·能对流感病毒任何片段进行突变的一个特殊系统 | 第14-15页 |
| ·完全以克隆的cDNA 为基础的反向遗传操作系统 | 第15-19页 |
| ·反向遗传学在流感病毒中的应用和前景 | 第19-21页 |
| ·反向遗传学在流感病毒致病性方面的研究 | 第19-20页 |
| ·反向遗传学在流感蛋白功能研究中的研究 | 第20-21页 |
| ·应用反向遗传学筛选疫苗候选株 | 第21页 |
| ·结束语 | 第21-22页 |
| 第二章 流感疫苗的研究进展 | 第22-27页 |
| ·流感病毒灭活疫苗 | 第22-23页 |
| ·流感全病毒灭活疫苗 | 第22页 |
| ·裂解型流感灭活疫苗 | 第22页 |
| ·亚单位型流感灭活疫苗 | 第22-23页 |
| ·弱毒活疫苗 | 第23-24页 |
| ·温度敏感突变株（TS） | 第23页 |
| ·选择宿主范围变异体 | 第23页 |
| ·冷适应弱毒活疫苗 | 第23-24页 |
| ·基因工程疫苗 | 第24页 |
| ·基因工程活疫苗 | 第24页 |
| ·基因工程亚单位疫苗 | 第24页 |
| ·核酸疫苗 | 第24页 |
| ·通用疫苗 | 第24-25页 |
| ·佐剂疫苗 | 第25页 |
| ·以哺乳动物细胞为基质制备流感疫苗 | 第25页 |
| ·免疫途径的选择 | 第25-26页 |
| ·结束语 | 第26-27页 |
| 试验研究 | 第27页 |
| 第三章 2006—2007 流行株A/New Caledonia/20/99 冷适应株的拯救 | 第27-40页 |
| ·材料 | 第28-30页 |
| ·病毒、鸡胚、细胞和菌种 | 第28页 |
| ·8 质粒病毒拯救系统 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28-29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·分子生物学分析软件 | 第29页 |
| ·常用试剂的配制 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-36页 |
| ·用于RNA 操作试剂和器材的处理 | 第30页 |
| ·引物的设计与合成 | 第30页 |
| ·病毒基因组RNA 的提取 | 第30-31页 |
| ·反转录（RT）病毒全基因组 | 第31页 |
| ·聚合酶链式反应（PCR）扩增病毒HA 和NA 片段 | 第31-32页 |
| ·目的片段的回收 | 第32页 |
| ·目的片段与pMD-19T 载体的连接 | 第32-33页 |
| ·感受态细胞的制备（CaCl_2 法）和连接产物的转化 | 第33页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组双向转录/表达质粒的构建 | 第34-35页 |
| ·pMVD-H1HA，pMVD-H1NA 的功能验证 | 第35页 |
| ·2006—2007 流感病毒冷适应株的拯救 | 第35-36页 |
| ·结果 | 第36-37页 |
| ·RT-PCR 扩增HA、NA 片段 | 第36页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第36页 |
| ·“7+1”转染验证pMVD-H1HA、pMVD-H1NA 功能 | 第36页 |
| ·冷适应病毒株rMDV-H1 的拯救 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| 第四章 冷适应株rMDV-H1 的生物学特性初步研究 | 第40-52页 |
| ·材料 | 第40-42页 |
| ·病毒株、细胞株、鸡胚、标准血清 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40-41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·主要溶液的配制 | 第41-42页 |
| ·方法 | 第42-47页 |
| ·rMDV-H1 的稳定性试验 | 第42-43页 |
| ·rMDV-H1 的序列验证 | 第43页 |
| ·rMDV-H1 冷适应特性的鉴定 | 第43页 |
| ·间接免疫荧光检测（IFA） | 第43页 |
| ·rMDV-H1 毒力的测定 | 第43-44页 |
| ·SDS-PAGE 鉴定重配病毒rMDV-H1 | 第44-47页 |
| ·结果 | 第47-50页 |
| ·rMDV-H1 的稳定性试验 | 第47页 |
| ·rMDV-H1 的序列验证 | 第47页 |
| ·rMDV-H1 的冷适应性鉴定 | 第47-49页 |
| ·间接免疫荧光检测（IFA） | 第49页 |
| ·rMDV-H1 的毒力测定 | 第49-50页 |
| ·SDS-PAGE 鉴定重配病毒rMDV-H1 | 第50页 |
| ·讨论 | 第50-51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| 第五章 冷适应株rMDV-H1 免疫原性的初步研究 | 第52-62页 |
| ·材料 | 第52-54页 |
| ·细胞株、鸡胚、小鼠 | 第52-53页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·主要仪器 | 第53页 |
| ·主要溶液的配制 | 第53-54页 |
| ·方法 | 第54-57页 |
| ·重配病毒病毒库的建立 | 第54页 |
| ·重配病毒的纯化和毒力滴定 | 第54-55页 |
| ·重配病毒小鼠动物模型的建立 | 第55页 |
| ·重配病毒免疫小鼠血清IgG、sIgA 的测定 | 第55-57页 |
| ·重配病毒免疫小鼠血清血凝抑制抗体的测定 | 第57页 |
| ·重配病毒免疫小鼠血清交叉保护性的测定 | 第57页 |
| ·结果 | 第57-60页 |
| ·纯化后病毒的毒力滴定 | 第57-58页 |
| ·间接 ELISA 检测血清 IgG | 第58页 |
| ·间接 ELISA 检测肺冲洗液、阴道冲洗液和鼻咽冲洗液 sIgA | 第58-59页 |
| ·间接 ELISA 检测血清 IgG 亚类 | 第59页 |
| ·HIA 试验检测血清中的血凝抑制抗体 | 第59页 |
| ·重配病毒免疫小鼠血清交叉保护性的测定 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-61页 |
| ·小结 | 第61-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 英文缩略词 | 第69-71页 |
| 附录 | 第71-75页 |
| 致谢 | 第75-77页 |
| 作者简介 | 第77页 |
