| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 第一篇 文献综述 | 第13-41页 |
| 第一章 LIM家族的研究概况 | 第13-29页 |
| 1 LIM家族的研究概况 | 第13-18页 |
| ·LIM蛋白的分类 | 第13-14页 |
| ·LIM蛋白的功能 | 第14-18页 |
| ·LIM同形域蛋白(LIM-HD) | 第14-16页 |
| ·只含有LIM结构域的蛋白质(LIM-only) | 第16-17页 |
| ·LIM激酶(LIM-K) | 第17-18页 |
| ·其它LIM蛋白的功能 | 第18页 |
| 2 Lhx8基因的研究进展 | 第18-25页 |
| ·Lhx8基因的结构和表达 | 第18-19页 |
| ·Lhx8基因与卵泡发育及卵母细胞成熟 | 第19-25页 |
| ·卵泡发育及其调控因子 | 第19-20页 |
| ·卵母细胞成熟及其调控因子 | 第20-22页 |
| ·Lhx8基因在卵泡发育和卵母细胞成熟分化过程的作用 | 第22-25页 |
| 参考文献 | 第25-29页 |
| 第二章 基因的克隆及生物信息学分析 | 第29-41页 |
| 1 基因克隆的几种常用方法 | 第29-33页 |
| ·根据已知探针克隆基因 | 第29页 |
| ·未知序列的基因打靶 | 第29-30页 |
| ·随机引物法克隆未知序列基因 | 第29页 |
| ·差异显示PCR(DD-PCR) | 第29-30页 |
| ·差减杂交PCR(RDA-PCR) | 第30页 |
| ·用特异抗体克隆基因 | 第30页 |
| ·特异基因的功能克隆 | 第30-31页 |
| ·EST电子克隆及RACE技术的应用 | 第31-33页 |
| ·EST电子克隆 | 第31-32页 |
| ·RACE技术的原理 | 第32-33页 |
| 2 核酸序列分析 | 第33-34页 |
| ·ORF(Open Reading Frame)分析 | 第33页 |
| ·染色体定位 | 第33-34页 |
| ·基因结构分析 | 第34页 |
| ·基因上游调控区分析 | 第34页 |
| 3 蛋白质结构分析和功能预测 | 第34-37页 |
| ·蛋白质氨基酸组成、分子量和等电点分析 | 第35页 |
| ·疏水性分析 | 第35页 |
| ·信号肽预测 | 第35-36页 |
| ·跨膜区预测 | 第36页 |
| ·亚细胞定位预测 | 第36页 |
| ·蛋白质功能结构域分析 | 第36-37页 |
| ·蛋白质多序列比对和分子系统发生分析 | 第37页 |
| 4 小结 | 第37页 |
| 5 本试验研究的目的和意义 | 第37-39页 |
| 参考文献 | 第39-41页 |
| 第二篇 实验研究 | 第41-81页 |
| 第三章 猪Lhx8基因的克隆测序 | 第41-59页 |
| 1 材料与方法 | 第41-53页 |
| ·材料 | 第41-44页 |
| ·实验动物与样品采集 | 第41页 |
| ·网络资源及软件 | 第41-42页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42-43页 |
| ·主要溶液及其配制 | 第43-44页 |
| ·方法 | 第44-53页 |
| ·猪Lhx8基因的电子克隆 | 第44页 |
| ·引物设计 | 第44-45页 |
| ·RT-PCR扩增ORF区 | 第45-47页 |
| ·5'RACE-PCR扩增5'UTR | 第47-51页 |
| ·cDNA克隆测序 | 第51-53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-57页 |
| ·猪EST序列的获取 | 第53-54页 |
| ·EST序列的拼接 | 第54页 |
| ·PCR扩增ORF区 | 第54-55页 |
| ·5'RACE扩增5'UTR | 第55页 |
| ·PCR产物克隆测序 | 第55-57页 |
| 3 讨论 | 第57-58页 |
| ·Lhx8基因的电子克隆 | 第57页 |
| ·RACE技术的优缺点 | 第57页 |
| ·TOP TA克隆和快速鉴定的优点 | 第57-58页 |
| 4 小结 | 第58-59页 |
| 第四章 蛋白质序列的生物信息学分析 | 第59-69页 |
| 1 材料与方法 | 第59-61页 |
| ·材料 | 第59页 |
| ·方法 | 第59-61页 |
| ·ORF区预测 | 第59页 |
| ·蛋白质氨基酸组成、分子量和等电点分析 | 第59-60页 |
| ·蛋白质疏水性分析 | 第60页 |
| ·蛋白质信号肽预测 | 第60页 |
| ·跨膜区预测 | 第60页 |
| ·亚细胞定位预测 | 第60-61页 |
| ·蛋白质功能结构域预测 | 第61页 |
| ·蛋白质氨基酸序列间的多重比对和分子系统发生分析 | 第61页 |
| 2 结果与分析 | 第61-67页 |
| ·ORF分析 | 第61页 |
| ·氨基酸组成、分子量和等电点 | 第61-62页 |
| ·疏水性分析 | 第62-63页 |
| ·信号肽分析 | 第63页 |
| ·跨膜区分析 | 第63-64页 |
| ·亚细胞定位预测 | 第64页 |
| ·蛋白质结构域预测 | 第64-65页 |
| ·蛋白质氨基酸序列间的多重比对和分子系统发生分析 | 第65-67页 |
| ·蛋白质序列多重比对 | 第65-66页 |
| ·分子系统发生分析 | 第66-67页 |
| 3 讨论 | 第67-68页 |
| 4 小结 | 第68-69页 |
| 第五章 猪Lhx8基因在组织和附植前胚胎中的表达分析 | 第69-79页 |
| 1 材料与方法 | 第69-73页 |
| ·材料 | 第69-70页 |
| ·实验样品 | 第69页 |
| ·主要试剂 | 第69页 |
| ·主要仪器 | 第69-70页 |
| ·方法 | 第70-73页 |
| ·卵母细胞的采集、培养及附植前胚胎的获得 | 第70-71页 |
| ·引物设计 | 第71页 |
| ·总RNA抽提(同第二章) | 第71页 |
| ·RNA浓度和纯度检测 | 第71页 |
| ·第一链cDNA合成 | 第71-72页 |
| ·cDNA结果鉴定 | 第72页 |
| ·实时定量PCR(qRT-PCR) | 第72-73页 |
| 2 结果与分析 | 第73-75页 |
| ·Lhx8基因在各组织中的相对表达 | 第73页 |
| ·GAPDH和Lhx8基因的荧光定量 | 第73-74页 |
| ·Lhx8基因在卵母细胞和附植前胚胎中的表达分析 | 第74-75页 |
| 3 讨论 | 第75-77页 |
| ·关于含内标化的半定量RT-PCR | 第75-76页 |
| ·内参基因的选择 | 第76页 |
| ·各种实时荧光定量PCR方法的比较 | 第76-77页 |
| ·Lhx8 mRNA的相对表达 | 第77页 |
| 4 小结 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-81页 |
| 全文结论 | 第81-83页 |
| 附录 | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85-87页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第87页 |
