摘要 | 第1-11页 |
ABSTRACT | 第11-13页 |
第一篇 文献综述 | 第13-32页 |
第一章 卵泡发育的遗传调控 | 第13-23页 |
1 卵泡发育 | 第13-14页 |
2 卵泡发育的调节因素 | 第14-22页 |
·激素的调节作用 | 第14-16页 |
·卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH) | 第14-15页 |
·类固醇类激素 | 第15页 |
·抑制素和激活素 | 第15页 |
·泌乳素 | 第15-16页 |
·胰岛素 | 第16页 |
·生长因子的调节作用 | 第16-19页 |
·表皮生长因子家族 | 第17页 |
·胰岛素样生长因子家族 | 第17-18页 |
·转化生长因子家族 | 第18-19页 |
·转录调控因子的调节作用 | 第19-22页 |
·Foxl2 | 第19页 |
·Pou5f1 | 第19页 |
·c-myc基因 | 第19-20页 |
·同源盒家族基因NOBOX | 第20-21页 |
·生殖细胞特异性转录因子-FIGα | 第21页 |
·其他转录调控因子 | 第21-22页 |
3 小结 | 第22-23页 |
第二章 利用EST序列克隆新基因及生物信息学分析 | 第23-32页 |
1 基于EST的电子克隆策略 | 第23-26页 |
·电子克隆的基本策略 | 第24-26页 |
·EST序列的获取 | 第24-25页 |
·EST序列拼接软件 | 第25页 |
·EST技术的不足之处及解决对策 | 第25-26页 |
2 核酸序列分析 | 第26-27页 |
·ORF(Open Reading Frame)分析 | 第26页 |
·染色体定位 | 第26页 |
·基因结构分析 | 第26页 |
·基因上游调控区分析 | 第26-27页 |
3 蛋白质结构分析和功能预测 | 第27-30页 |
·蛋白质氨基酸组成、分子量和等电点分析 | 第27-28页 |
·疏水性分析 | 第28页 |
·信号肽预测 | 第28页 |
·跨膜区预测 | 第28页 |
·亚细胞定位预测 | 第28-29页 |
·蛋白质功能结构域分析 | 第29页 |
·蛋白质多序列比对和分子系统发生分析 | 第29-30页 |
4 小结 | 第30页 |
5 本试验研究的目的和意义 | 第30-32页 |
第二篇 试验研究 | 第32-66页 |
第三章 猪NOBOX基因的克隆测序 | 第32-49页 |
1 材料与方法 | 第32-43页 |
·材料 | 第32-34页 |
·试验样品 | 第32页 |
·网络资源及软件 | 第32-33页 |
·主要试剂及试剂盒 | 第33页 |
·主要仪器 | 第33页 |
·主要溶液及其配制 | 第33-34页 |
·方法 | 第34-43页 |
·猪NOBOX基因的电子克隆 | 第34-35页 |
·引物设计 | 第35-36页 |
·3'RACE扩增NOBOX 3’端全长 | 第36-39页 |
·5'RACE扩增5'UTR | 第39-40页 |
·cDNA克隆测序 | 第40-43页 |
2 结果与分析 | 第43-46页 |
·猪EST序列的获取 | 第43-44页 |
·EST分析 | 第44页 |
·3'RACE扩增3'cDNA末端 | 第44-45页 |
·PCR产物克隆测序 | 第45页 |
·测序结果分析 | 第45页 |
·5'RACE扩增5'UIR | 第45-46页 |
·PCR产物克隆测序 | 第45-46页 |
·测序结果分析 | 第46页 |
3 讨论 | 第46-49页 |
·NOBOX基因的电子克隆 | 第46-47页 |
·RACE技术的优缺点 | 第47页 |
·如何有效降低单侧引物扩增的影响 | 第47-49页 |
第四章 蛋白质序列的生物信息学分析 | 第49-57页 |
1 方法 | 第49-51页 |
·ORF区预测 | 第49页 |
·蛋白质氨基酸组成、分子量和等电点分析 | 第49-50页 |
·蛋白质疏水性分析 | 第50页 |
·蛋白质信号肽预测 | 第50页 |
·跨膜区预测 | 第50页 |
·亚细胞定位预测 | 第50-51页 |
·蛋白质功能结构域预测 | 第51页 |
·蛋白质氨基酸序列间的多重比对和分子系统发生分析 | 第51页 |
2 结果与分析 | 第51-55页 |
·ORF分析 | 第51页 |
·氨基酸组成、分子量和等电点 | 第51-52页 |
·疏水性分析 | 第52-53页 |
·信号肽分析 | 第53页 |
·跨膜区分析 | 第53-54页 |
·亚细胞定位预测 | 第54页 |
·蛋白质结构域预测 | 第54页 |
·蛋白质氨基酸序列间的多重比对和分子系统发生分析 | 第54-55页 |
·蛋白质序列多重比对 | 第54页 |
·分子系统发生分析 | 第54-55页 |
3 讨论 | 第55-57页 |
第五章 猪NOBOX基因的表达分析 | 第57-66页 |
1 材料与方法 | 第57-60页 |
·材料 | 第57-58页 |
·试验样品 | 第57页 |
·主要试剂 | 第57页 |
·主要仪器 | 第57-58页 |
·主要溶液及其配制(同第三章) | 第58页 |
·方法 | 第58-60页 |
·引物设计 | 第58页 |
·样本收集 | 第58-59页 |
·总RNA抽提(同第三章) | 第59页 |
·RNA浓度和纯度检测(同第三章) | 第59页 |
·第一链cDNA合成 | 第59页 |
·β-actin gene PCR检测反转录效果 | 第59页 |
·Real-time PCR | 第59-60页 |
2 结果与分析 | 第60-63页 |
·RNA的纯度和浓度 | 第60页 |
·β-actin检测反转录效果 | 第60-61页 |
·NOBOX基因在细胞及组织中的扩增结果 | 第61页 |
·β-actin和NOBOX基因的荧光定量及表达分析 | 第61-63页 |
3 讨论 | 第63-66页 |
参考文献 | 第66-70页 |
全文结论 | 第70-71页 |
附录 RACE技术 | 第71-77页 |
1 原理 | 第71-72页 |
2 试验步骤 | 第72-77页 |
·RNA的去磷酸化 | 第72-73页 |
·全长mRNA的脱帽 | 第73页 |
·在脱帽的mRNA上连接寡聚RNA | 第73-74页 |
·反转录mRNA | 第74-77页 |
致谢 | 第77-79页 |
攻读硕士期间发表论文 | 第79页 |