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猪NOBOX基因的克隆、生物信息学预测及定量表达分析

摘要第1-11页
ABSTRACT第11-13页
第一篇 文献综述第13-32页
 第一章 卵泡发育的遗传调控第13-23页
  1 卵泡发育第13-14页
  2 卵泡发育的调节因素第14-22页
   ·激素的调节作用第14-16页
     ·卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)第14-15页
     ·类固醇类激素第15页
     ·抑制素和激活素第15页
     ·泌乳素第15-16页
     ·胰岛素第16页
   ·生长因子的调节作用第16-19页
     ·表皮生长因子家族第17页
     ·胰岛素样生长因子家族第17-18页
     ·转化生长因子家族第18-19页
   ·转录调控因子的调节作用第19-22页
     ·Foxl2第19页
     ·Pou5f1第19页
     ·c-myc基因第19-20页
     ·同源盒家族基因NOBOX第20-21页
     ·生殖细胞特异性转录因子-FIGα第21页
     ·其他转录调控因子第21-22页
  3 小结第22-23页
 第二章 利用EST序列克隆新基因及生物信息学分析第23-32页
  1 基于EST的电子克隆策略第23-26页
   ·电子克隆的基本策略第24-26页
     ·EST序列的获取第24-25页
     ·EST序列拼接软件第25页
     ·EST技术的不足之处及解决对策第25-26页
  2 核酸序列分析第26-27页
   ·ORF(Open Reading Frame)分析第26页
   ·染色体定位第26页
   ·基因结构分析第26页
   ·基因上游调控区分析第26-27页
  3 蛋白质结构分析和功能预测第27-30页
   ·蛋白质氨基酸组成、分子量和等电点分析第27-28页
   ·疏水性分析第28页
   ·信号肽预测第28页
   ·跨膜区预测第28页
   ·亚细胞定位预测第28-29页
   ·蛋白质功能结构域分析第29页
   ·蛋白质多序列比对和分子系统发生分析第29-30页
  4 小结第30页
  5 本试验研究的目的和意义第30-32页
第二篇 试验研究第32-66页
 第三章 猪NOBOX基因的克隆测序第32-49页
  1 材料与方法第32-43页
   ·材料第32-34页
     ·试验样品第32页
     ·网络资源及软件第32-33页
     ·主要试剂及试剂盒第33页
     ·主要仪器第33页
     ·主要溶液及其配制第33-34页
   ·方法第34-43页
     ·猪NOBOX基因的电子克隆第34-35页
     ·引物设计第35-36页
     ·3'RACE扩增NOBOX 3’端全长第36-39页
     ·5'RACE扩增5'UTR第39-40页
     ·cDNA克隆测序第40-43页
  2 结果与分析第43-46页
   ·猪EST序列的获取第43-44页
   ·EST分析第44页
   ·3'RACE扩增3'cDNA末端第44-45页
     ·PCR产物克隆测序第45页
     ·测序结果分析第45页
   ·5'RACE扩增5'UIR第45-46页
     ·PCR产物克隆测序第45-46页
     ·测序结果分析第46页
  3 讨论第46-49页
   ·NOBOX基因的电子克隆第46-47页
   ·RACE技术的优缺点第47页
   ·如何有效降低单侧引物扩增的影响第47-49页
 第四章 蛋白质序列的生物信息学分析第49-57页
  1 方法第49-51页
   ·ORF区预测第49页
   ·蛋白质氨基酸组成、分子量和等电点分析第49-50页
   ·蛋白质疏水性分析第50页
   ·蛋白质信号肽预测第50页
   ·跨膜区预测第50页
   ·亚细胞定位预测第50-51页
   ·蛋白质功能结构域预测第51页
   ·蛋白质氨基酸序列间的多重比对和分子系统发生分析第51页
  2 结果与分析第51-55页
   ·ORF分析第51页
   ·氨基酸组成、分子量和等电点第51-52页
   ·疏水性分析第52-53页
   ·信号肽分析第53页
   ·跨膜区分析第53-54页
   ·亚细胞定位预测第54页
   ·蛋白质结构域预测第54页
   ·蛋白质氨基酸序列间的多重比对和分子系统发生分析第54-55页
     ·蛋白质序列多重比对第54页
     ·分子系统发生分析第54-55页
  3 讨论第55-57页
 第五章 猪NOBOX基因的表达分析第57-66页
  1 材料与方法第57-60页
   ·材料第57-58页
     ·试验样品第57页
     ·主要试剂第57页
     ·主要仪器第57-58页
     ·主要溶液及其配制(同第三章)第58页
   ·方法第58-60页
     ·引物设计第58页
     ·样本收集第58-59页
     ·总RNA抽提(同第三章)第59页
     ·RNA浓度和纯度检测(同第三章)第59页
     ·第一链cDNA合成第59页
     ·β-actin gene PCR检测反转录效果第59页
     ·Real-time PCR第59-60页
  2 结果与分析第60-63页
   ·RNA的纯度和浓度第60页
   ·β-actin检测反转录效果第60-61页
   ·NOBOX基因在细胞及组织中的扩增结果第61页
   ·β-actin和NOBOX基因的荧光定量及表达分析第61-63页
  3 讨论第63-66页
参考文献第66-70页
全文结论第70-71页
附录 RACE技术第71-77页
 1 原理第71-72页
 2 试验步骤第72-77页
   ·RNA的去磷酸化第72-73页
   ·全长mRNA的脱帽第73页
   ·在脱帽的mRNA上连接寡聚RNA第73-74页
   ·反转录mRNA第74-77页
致谢第77-79页
攻读硕士期间发表论文第79页

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