| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 插图和附表清单 | 第12-14页 |
| 缩略词 | 第14-15页 |
| 第一章 小反刍兽疫研究进展 | 第15-27页 |
| ·PPRV病原学 | 第15-17页 |
| ·病毒的分类与特性 | 第15页 |
| ·病毒各蛋白的结构及功能 | 第15-17页 |
| ·PPRV流行病学 | 第17-22页 |
| ·PPRV的地理分布 | 第17-18页 |
| ·PPRV的起源 | 第18-19页 |
| ·PPR的临床症状 | 第19-20页 |
| ·PPR发病机理及病理变化 | 第20-21页 |
| ·PPR的传播方式 | 第21页 |
| ·PPRV易感动物 | 第21-22页 |
| ·PPRV的诊断技术及研究进展 | 第22-24页 |
| ·临床诊断 | 第22页 |
| ·实验室诊断 | 第22-24页 |
| ·PPR的防治 | 第24-25页 |
| ·减毒疫苗 | 第24-25页 |
| ·DIVA疫苗 | 第25页 |
| ·多价疫苗 | 第25页 |
| ·本课题研究的目的及意义 | 第25-27页 |
| 第二章 小反刍兽疫核蛋白在昆虫细胞中的表达 | 第27-50页 |
| ·引言 | 第27页 |
| ·材料 | 第27-34页 |
| ·主要的材料及试剂 | 第27-28页 |
| ·主要试剂的配制 | 第28-32页 |
| ·主要仪器设备 | 第32-33页 |
| ·引物的设计与合成 | 第33-34页 |
| ·方法 | 第34-45页 |
| ·技术路线 | 第34页 |
| ·目的基因的扩增 | 第34-36页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| ·克隆载体PMD19T-PPRV-N的构建 | 第37-38页 |
| ·重组供体质粒pFastBacHTA-PPRV-N的构建 | 第38-40页 |
| ·重组穿梭质粒Bacmid-PPRV-N的构建 | 第40-42页 |
| ·Sf9细胞的准备 | 第42页 |
| ·重组穿梭质粒在昆虫细胞中的表达 | 第42-43页 |
| ·重组杆状病毒的扩大培养 | 第43页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE鉴定和Western blot分析 | 第43-45页 |
| ·实验结果 | 第45-48页 |
| ·目的基因扩增 | 第45页 |
| ·重组供体质粒pFastBacHTA-PPRV-N的鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组穿梭质粒Bacmid-PPRV-N的PCR鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组蛋白在昆虫细胞中表达 | 第47页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE和Western blot | 第47-48页 |
| ·结论 | 第48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| 第三章 抗PPRV N蛋白单抗的制备及生物学特性鉴定 | 第50-66页 |
| ·引言 | 第50页 |
| ·材料 | 第50-52页 |
| ·细胞、毒株和实验动物 | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50页 |
| ·主要试剂的配制 | 第50-52页 |
| ·方法 | 第52-60页 |
| ·技术路线 | 第52页 |
| ·免疫原的制备 | 第52-53页 |
| ·免疫方案 | 第53-54页 |
| ·间接ELISA检测方法的建立 | 第54-55页 |
| ·细胞融合 | 第55-56页 |
| ·杂交瘤细胞培养 | 第56-58页 |
| ·单克隆抗体的大量制备 | 第58页 |
| ·单抗腹水的纯化 | 第58页 |
| ·杂交瘤细胞生物学特性鉴定 | 第58-60页 |
| ·结果 | 第60-64页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第60-61页 |
| ·单抗腹水的纯化 | 第61-62页 |
| ·杂交瘤细胞培养上清及腹水效价的测定 | 第62页 |
| ·单克隆抗体特异性鉴定 | 第62-63页 |
| ·单克隆抗体抗原识别位点分析 | 第63页 |
| ·单克隆抗体5B11和3H10-3B8亚类的鉴定 | 第63页 |
| ·杂交瘤细胞株的染色体分析 | 第63-64页 |
| ·单克隆抗体相对亲和力常数的测定 | 第64页 |
| ·结论 | 第64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| 第四章 PPRV C-ELISA抗体检测方法的建立及条件优化 | 第66-78页 |
| ·引言 | 第66页 |
| ·材料 | 第66-69页 |
| ·主要的材料及试剂 | 第66-67页 |
| ·主要试剂的配制 | 第67-69页 |
| ·方法 | 第69-70页 |
| ·技术路线 | 第69页 |
| ·PPRV C-ELISA抗体检测方法的程序 | 第69页 |
| ·c-ELISA抗体检测方法条件优化 | 第69-70页 |
| ·结果 | 第70-76页 |
| ·抗原最佳包被浓度和单抗最佳工作浓度的确定 | 第70-72页 |
| ·样品稀释液的确定 | 第72-73页 |
| ·样品与单抗最佳作用时间 | 第73-74页 |
| ·HRP羊抗鼠二抗最佳作用时间 | 第74页 |
| ·底物液最佳反应时间 | 第74-75页 |
| ·临界值的确定 | 第75-76页 |
| ·结论 | 第76-77页 |
| ·讨论 | 第77-78页 |
| 第五章 PPRV C-ELISA抗体检测试剂盒的组装及初步应用 | 第78-93页 |
| ·引言 | 第78页 |
| ·材料 | 第78-80页 |
| ·血清 | 第78页 |
| ·试剂盒各组分的制备 | 第78-80页 |
| ·试剂盒的组装 | 第80-81页 |
| ·试剂盒说明书 | 第81-83页 |
| ·试剂盒敏感性检测 | 第83页 |
| ·试剂盒特异性检测 | 第83页 |
| ·试剂盒批间和批内可重复性试验 | 第83-84页 |
| ·批内重复性试验 | 第83-84页 |
| ·批间重复性试验 | 第84页 |
| ·试剂盒的初步应用 | 第84页 |
| ·结果 | 第84-91页 |
| ·试剂盒的组装 | 第84页 |
| ·试剂盒的敏感性 | 第84-86页 |
| ·试剂盒的特异性 | 第86页 |
| ·试剂盒批内可重复性 | 第86-87页 |
| ·试剂盒的批间可重复性 | 第87-88页 |
| ·试剂盒的初步应用 | 第88-91页 |
| ·结论 | 第91页 |
| ·讨论 | 第91-93页 |
| 第六章 结论与展望 | 第93-95页 |
| ·结论 | 第93页 |
| ·展望 | 第93-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-102页 |
| 附录 攻读硕士期间发表的论文目录 | 第102页 |
