| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 英文缩写符号及其中英文对照表 | 第14-17页 |
| 1 引言 | 第17-38页 |
| ·植物对盐胁迫适应机理 | 第17-20页 |
| ·解毒作用 | 第18-19页 |
| ·维持体内离子和渗透平衡 | 第19页 |
| ·生长调节 | 第19-20页 |
| ·逆境胁迫的信号途径 | 第20-22页 |
| ·依赖Ca2+的CDPK 信号途径 | 第20-21页 |
| ·依赖Ca~(2+)的SOS 信号途径 | 第21-22页 |
| ·不依赖Ca~(2+)的MAPK 信号途径 | 第22页 |
| ·MAPK 级联系统 | 第22-34页 |
| ·植物中的MAPKs | 第23-25页 |
| ·MAPKs 在植物环境胁迫信号转导中的作用 | 第25-30页 |
| ·MAPKs 与植物生物胁迫信号转导 | 第25-27页 |
| ·MAPKs 与植物非生物胁迫信号转导 | 第27-30页 |
| ·MAPKs 在干旱、高盐和低温胁迫下的信号转导 | 第27-28页 |
| ·MAPKs 在机械损伤胁迫下的信号转导 | 第28-29页 |
| ·MAPKs 在重金属胁迫下的信号转导 | 第29-30页 |
| ·MAPKs 在臭氧辐射下的信号转导 | 第30页 |
| ·MAPKs 与植物激素信号转导 | 第30-32页 |
| ·MAPKs 与ABA 信号转导 | 第30-31页 |
| ·MAPKs 与乙烯信号转导 | 第31页 |
| ·MAPKs 与生长素信号转导 | 第31页 |
| ·MAPKs 与赤霉素信号转导 | 第31-32页 |
| ·MAPKs 与水杨酸信号转导 | 第32页 |
| ·MAPKs 与氧化胁迫信号转导 | 第32页 |
| ·植物MAPKs 与胞质分裂和发育 | 第32-33页 |
| ·MAPK 级联系统的复杂性和特异性 | 第33-34页 |
| ·植物耐盐基因工程进展 | 第34-37页 |
| ·本研究的目的意义 | 第37-38页 |
| 2 材料与方法 | 第38-59页 |
| ·试验材料 | 第38-39页 |
| ·植物材料及处理 | 第38页 |
| ·供试材料 | 第38页 |
| ·试验处理 | 第38页 |
| ·菌株与质粒 | 第38页 |
| ·酶及生化试剂 | 第38页 |
| ·PCR 引物 | 第38-39页 |
| ·培养基（见附录） | 第39页 |
| ·试验方法 | 第39-59页 |
| ·植物材料总RNA 的提取 | 第39-40页 |
| ·反转录cDNA 第一条链的合成 | 第40页 |
| ·cDNA 纯化（用于5′RACE） | 第40-41页 |
| ·对cDNA 进行末端加尾（用于5′RACE） | 第41页 |
| ·cDNA 全长序列的获得 | 第41-44页 |
| ·兼并引物PCR 获得黄瓜CsNMAPK 基因的中间片段 | 第41-42页 |
| ·3′RACE 获得3′端序列 | 第42页 |
| ·5′RACE 获得5′端序列 | 第42-43页 |
| ·cDNA 全长序列的获得 | 第43-44页 |
| ·DNA 片段与克隆载体的连接 | 第44页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第44-45页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第44页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化及克隆筛选 | 第44-45页 |
| ·碱法质粒DNA 的提取 | 第45页 |
| ·质粒DNA 的酶切鉴定 | 第45-46页 |
| ·DNA 序列测定 | 第46页 |
| ·凝胶电泳中DNA 片段的回收 | 第46页 |
| ·地高辛（DIG）标记的Northern blot | 第46-50页 |
| ·黄瓜CsNMAPK 的原核表达及抗体制备 | 第50-52页 |
| ·原核表达载体的构建（图4） | 第50-51页 |
| ·E.coli BL21 原核表达的诱导 | 第51页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第51-52页 |
| ·抗体的制备 | 第52页 |
| ·Western blot | 第52-53页 |
| ·CsNMAPK 基因正义和反义表达载体的构建 | 第53-54页 |
| ·CsNMAPK 正义表达载体的构建 | 第53-54页 |
| ·CsNMAPK 反义表达载体的构建 | 第54页 |
| ·根癌农杆菌LBA4404 感受态细胞的制备与转化 | 第54-55页 |
| ·农杆菌感受态细胞制备 | 第54-55页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第55页 |
| ·农杆菌介导的烟草的转化 | 第55页 |
| ·农杆菌培养 | 第55页 |
| ·烟草转化、培养和植株再生 | 第55页 |
| ·基因组DNA 的提取（CTAB 法） | 第55-56页 |
| ·转基因烟草的PCR 筛选 | 第56页 |
| ·转基因烟草种子的耐逆性分析 | 第56页 |
| ·NO_3~-胁迫对烟草幼苗生理特性的影响 | 第56页 |
| ·光合特性的测定 | 第56页 |
| ·丙二醛含量的测定 | 第56-57页 |
| ·电解质相对渗漏率的测定 | 第57页 |
| ·抗氧化物酶活性的测定 | 第57页 |
| ·H_2O_2的含量测定 | 第57页 |
| ·子房注射法转化黄瓜 | 第57页 |
| ·卡那霉素涂抹叶片初步筛选转基因植株 | 第57页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第57-59页 |
| ·反转录反应 | 第57-58页 |
| ·Real-Time PCR 测定 | 第58-59页 |
| 3 结果与分析 | 第59-81页 |
| ·黄瓜CsNMAPK 基因的分离 | 第59-60页 |
| ·CsNMAPK 基因的序列分析 | 第60-64页 |
| ·黄瓜CsNMAPK 基因的表达情况 | 第64-67页 |
| ·CsNMAPK 在NO_3~-胁迫下的表达分析 | 第64-65页 |
| ·CsNMAPK 在耐盐品种‘新泰密刺’和盐敏感品种‘神农春五’中的表达分析 | 第65-66页 |
| ·CsNMAPK 在其它非生物胁迫下的表达分析 | 第66-67页 |
| ·CsNMAPK 的原核表达及抗体制备 | 第67-68页 |
| ·原核表达载体pET-CsNMAPK 的构建 | 第67页 |
| ·重组蛋白表达与SDS-PAGE 分析 | 第67-68页 |
| ·CsNMAPK 基因在烟草中的过表达及转基因烟草的耐逆性分析 | 第68-77页 |
| ·转基因烟草表达载体pBI-CsNMAPK 的构建及转基因烟草的鉴定 | 第68-70页 |
| ·转基因烟草的根系长度 | 第70页 |
| ·转基因烟草种子的耐逆性分析 | 第70-73页 |
| ·转基因烟草在含甘露醇的MS 培养基上的萌发情况 | 第70-71页 |
| ·转基因烟草在含NaCl 的MS 培养基上的萌发情况 | 第71-72页 |
| ·转基因烟草在含NO_3~-的MS 培养基上的萌发情况 | 第72-73页 |
| ·转基因烟草苗期的NO_3~-胁迫抗性分析 | 第73-77页 |
| ·NO_3~-胁迫对转基因烟草鲜重和干重的影响 | 第73页 |
| ·NO_3~-胁迫对转基因烟草MDA 含量和电解质相对渗漏率的影响 | 第73-74页 |
| ·NO_3~-胁迫对转基因烟草H_2O_2含量的影响 | 第74页 |
| ·NO_3~-胁迫对转基因烟草抗氧化物酶活性的影响 | 第74-76页 |
| ·NO_3~-胁迫对转基因烟草光合速率的影响 | 第76页 |
| ·NO_3~-胁迫对转基因烟草脯氨酸的影响 | 第76-77页 |
| ·CsNMAPK 基因的正义和反义表达载体转化黄瓜 | 第77-81页 |
| ·子房注射法将CsNMAPK 基因的正义和反义表达载体注入黄瓜 | 第77-78页 |
| ·转基因黄瓜幼苗的卡那霉素初步筛选 | 第78页 |
| ·转基因黄瓜的PCR 筛选 | 第78-79页 |
| ·转基因黄瓜的Real-time PCR 检测 | 第79-80页 |
| ·转反义CsNMAPK 基因黄瓜的株高 | 第80-81页 |
| 4 讨论 | 第81-85页 |
| ·黄瓜CsNMAPK 基因的克隆及表达特性 | 第81-82页 |
| ·过量表达CsNMAPK 基因提高了转基因烟草的耐旱和耐盐性 | 第82-83页 |
| ·子房注射法转基因黄瓜的获得 | 第83-85页 |
| 5 结论 | 第85-86页 |
| 本文创新点 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-102页 |
| 附录 | 第102-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
| 攻读学位期间文章发表情况 | 第106页 |
