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铜绿假单胞菌铁反应基因调控的研究

中文摘要第1-5页
Abstract第5-7页
目录第7-11页
图目录第11-12页
表目录第12-13页
缩略语第13-14页
第一章 绪论第14-32页
   ·铜绿假单胞菌介绍第14-15页
   ·铜绿假单胞菌对铁的吸收第15-19页
     ·铜绿假单胞菌可利用多种铁源第15-16页
     ·phu和has途径获取不同来源的血红素第16-17页
     ·siderophore媒介的铁吸收系统第17-18页
     ·铁的跨膜运输第18-19页
   ·铜绿假单胞菌铁的调节第19-22页
     ·Fur蛋白第19-20页
     ·小RNA PrrF第20-21页
     ·ECF sigma的调节第21-22页
   ·铜绿假单胞菌群体感应系统及其调节机制第22-24页
   ·铜绿假单胞菌铁与QS系统的关系第24-25页
     ·铁与QS系统相互联系第24页
     ·铁对QS系统的调控第24-25页
     ·QS系统对铁反应基因的调控第25页
     ·QS系统化合物对铁的螯合作用第25页
   ·生物被膜第25-26页
   ·含有HD-GYP结构域的双组分反应调节子第26-27页
   ·tol-oprL系统的结构及特点第27-28页
   ·tol-oprL系统的功能第28-29页
   ·铜绿假单胞菌中tol-oprL的特点第29页
   ·Orf1蛋白第29-30页
   ·研究内容、目的和意义第30-32页
第二章 实验材料和方法第32-54页
   ·实验材料第32-36页
     ·菌株和质粒第32-34页
     ·培养基的配置第34-35页
     ·试剂第35页
     ·仪器第35-36页
   ·菌体的培养条件第36页
   ·基本实验方法第36-43页
     ·PCR扩增及纯化第36-37页
     ·质粒的小量提取第37-38页
     ·质粒或DNA片断的酶切和连接第38-39页
     ·感受态细胞的制备第39页
     ·铜绿假单胞菌感受态细胞的快速制备方法第39页
     ·电转化第39-40页
     ·重组菌株的筛选第40页
     ·三亲株杂交实验第40-41页
     ·含有lux报告子融合基因表达的检测第41-42页
     ·含有lacZ报道子融合基因检测第42页
     ·生物被膜实验第42-43页
   ·PA2572实验的方法第43-46页
     ·PA2572敲除突变体的构建第43-45页
     ·含有lux的报告子在PAO1(△2572)中的表达测定第45-46页
     ·pMS402-2572在QS系统突变株中表达的测定第46页
     ·泳动实验第46页
   ·有关PA3899实验方法第46-48页
     ·PAO(△3899)突变体的构建第46-47页
     ·含有lux的报告子在PAO1(△3899)中的表达测定第47-48页
     ·pMS402-3899在QS系统突变体中表达的测定第48页
   ·tol-oprL的实验方法第48-51页
     ·总RNA的提取与检测第48-49页
     ·DNase Ⅰ的消化第49页
     ·RT-延伸实验第49-50页
     ·cDNA测序第50-51页
   ·构建启动子-报道子融合体第51-53页
     ·构建P1con∶∶lacz质粒pKD102z第51-52页
     ·构建含有luxCDABE报道子的融合质粒第52页
     ·β-galactosidase实验第52页
     ·含有lux报告子的基因表达测定第52-53页
   ·构建orf1敲除突变株第53页
   ·细胞大小的测量第53-54页
第三章 铁反应基因研究结果与讨论第54-78页
   ·PA2572的研究第54-63页
     ·PA2572突变体的构建第54-57页
     ·PA2572与铁反应基因的关系第57-59页
     ·PA2572与QS系统的关系第59页
     ·QS系统对PA2572的调节第59-61页
     ·突变体PAO1(△2572)的泳动性第61-63页
   ·PA3899的研究第63-68页
     ·PA3899突变体的构建第63-65页
     ·PA3899对pvdF和pchDCBA的影响第65-66页
     ·PA3899和QS系统的相互关系第66-67页
     ·PA3899对tol-oprL的作用第67-68页
   ·铁对QS的调节第68-73页
   ·不同铁浓度下突变体biofilm的生物量第73-75页
   ·讨论第75-78页
第四章 tol-oprL研究的结果与讨论第78-88页
   ·tol-oprL启动子区域的鉴定第78-82页
     ·P1区域两个启动子的鉴定第78-80页
     ·Pb和Pp启动子区域的确定第80-81页
     ·P1con和P1ind两个启动子的不同第81-82页
   ·QS系统对tol-oprL的调节第82-85页
   ·orf1敲除突变体的细胞形态第85-86页
   ·讨论第86-88页
结论第88-90页
参考文献第90-101页
科研成果第101-102页
致谢第102页

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