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表达H9亚型禽流感病毒HA基因重组新城疫病毒的研究

摘要第1-4页
Abstract第4-9页
1 前言第9-22页
   ·禽流感的概况第9-11页
     ·禽流感的病原及分子生物学特征第9-10页
     ·禽流感病毒的基因组结构第10-11页
     ·HA 基因功能第11页
   ·禽流感疫苗第11-13页
     ·灭活全病毒疫苗第11-12页
     ·亚单位疫苗第12页
     ·DNA 疫苗第12页
     ·重组活载体疫苗第12-13页
   ·新城疫病毒作为疫苗载体的研究进展第13-22页
     ·新城疫病毒的生物学特征第13-16页
       ·新城疫病毒的形态结构与功能第13-14页
       ·新城疫病毒致病力的分子基础第14-16页
     ·新城疫病毒的反向遗传操作第16-19页
       ·反向遗传操作概述第16页
       ·新城疫病毒感染性分子克隆的构建第16-19页
     ·新城疫病毒作为活病毒载体的可行性研究第19-21页
       ·外源基因插入新城疫病毒基因组的NP 与P 基因、M 与F 基因、H 与L 基因之间第19页
       ·外源基因插入新城疫病毒基因组的3′端第19-20页
       ·外源基因插入新城疫病毒基因组的F 与HN 基因之间第20页
       ·外源基因插入新城疫病毒基因组的HN 与L 基因之间第20页
       ·外源基因插入新城疫病毒基因组的P 与M 基因之间第20-21页
     ·新城疫病毒作为活病毒载体的应用前景第21-22页
2 实验一 表达H9 亚型禽流感病毒HA 基因重组新城疫病毒的构建第22-33页
   ·材料第22-23页
     ·细胞和病毒第22-23页
     ·试剂和仪器第23页
     ·实验动物第23页
   ·方法第23-26页
     ·引物设计与合成第23-24页
     ·HA 基因序列的调取与序列分析第24页
     ·表达HA 基因的全长cDNA 克隆的构建第24-25页
     ·病毒拯救第25页
     ·间接免疫荧光检测(IFA)第25页
     ·RT-PCR 鉴定及序列测定第25-26页
     ·Western-blot 检测重组病毒HA 基因表达第26页
   ·结果第26-31页
     ·HA 基因的调取结果第26-27页
     ·HA 基因重组新城疫病毒全基因组的构建第27-29页
     ·HA 基因重组新城疫病毒的拯救第29页
     ·rL-H9HA 外源基因的表达第29-30页
     ·Western-blot 检测重组病毒HA 基因表达第30-31页
   ·讨论与小结第31-33页
3 实验二 表达H9 亚型禽流感病毒HA 基因重组新城疫病毒的生物学特性及免疫效力的评估第33-42页
   ·材料第33-34页
     ·细胞和病毒第33页
     ·实验动物第33-34页
     ·试剂和仪器第34页
   ·方法第34-36页
     ·重组病毒rl-H9HA 的致病性试验第34-35页
       ·重组病毒鸡胚平均致死时间(MDT)的测定第34页
       ·重组病毒1d 鸡脑内致病指数(ICPI)的测定第34-35页
       ·重组病毒6 周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI)的测定第35页
     ·重组病毒的鸡胚生长特性第35页
     ·重组病毒对雏鸡的安全性试验第35-36页
     ·重组病毒的遗传稳定性试验第36页
     ·重组病毒对SPF 雏鸡的免疫保护试验第36页
   ·结果第36-40页
     ·重组病毒的致病性第36-37页
     ·重组病毒的生长特性第37-38页
     ·重组病毒对SPF 雏鸡的安全性第38页
     ·重组病毒的遗传稳定性第38-39页
     ·重组病毒对SPF 雏鸡的免疫保护试验第39-40页
   ·讨论与小结第40-42页
4 总体结论第42-43页
致谢第43-44页
参考文献第44-51页
附录第51-61页
作者简介第61页

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