应用酵母双杂交系统筛选与禽流感核蛋白相互作用的蛋白质
| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-23页 |
| ·禽流感病毒 | 第12-16页 |
| ·流感病毒的发生和危害 | 第12-13页 |
| ·流感病毒形态和基因组结构 | 第13-14页 |
| ·流感病毒流行病学 | 第14页 |
| ·禽流感基因编码蛋白的功能 | 第14-15页 |
| ·禽流感病毒的预防和治疗 | 第15-16页 |
| ·禽流感病毒核蛋白研究进展 | 第16-18页 |
| ·NP基因保守性的研究 | 第16页 |
| ·NP基因编码的蛋白 | 第16-18页 |
| ·酵母双杂交的研究进展 | 第18-23页 |
| ·酵母双杂交技术的基本原理 | 第19页 |
| ·酵母双杂交技术的应用 | 第19-21页 |
| ·酵母双杂交技术的优缺点 | 第21-23页 |
| 2 研究目的和意义 | 第23-24页 |
| 3 实验材料和方法 | 第24-48页 |
| ·菌种和质粒 | 第24-26页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第26-27页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| ·培养基及其他试剂的配制 | 第27-29页 |
| ·分子克隆实验方法 | 第29-34页 |
| ·PCR扩增目的片断NP | 第29-31页 |
| ·重组质粒pGBKT7-NP的构建 | 第31-34页 |
| ·酵母实验方法 | 第34-39页 |
| ·酵母菌的复苏与保存 | 第34页 |
| ·酵母感受态的制备及转化 | 第34页 |
| ·酵母菌株AH109,Y187的表型验证 | 第34-35页 |
| ·酵母菌株载体表达及自激活检测 | 第35-36页 |
| ·文库滴度的测定 | 第36页 |
| ·人脑cDNA文库的筛选 | 第36-37页 |
| ·接合效率的计算 | 第37页 |
| ·酵母质粒的营救 | 第37-38页 |
| ·阳性克隆的验证 | 第38-39页 |
| ·诱饵质粒的构建 | 第39-42页 |
| ·目的基因的扩增 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第40-41页 |
| ·诱饵质粒构建与鉴定 | 第41-42页 |
| ·酵母双杂交系统筛选与NP相互作用的宿主蛋白 | 第42-48页 |
| ·酵母菌株AH109,Y187的表型验证 | 第42页 |
| ·诱饵质粒酵母菌株自激活及毒性检测 | 第42-43页 |
| ·酵母的结合及效率 | 第43页 |
| ·共转化结果 | 第43-44页 |
| ·阳性克隆的自激活 | 第44页 |
| ·序列比对和分析 | 第44-46页 |
| ·AD质粒的酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·回复杂交 | 第47-48页 |
| 4 讨论与分析 | 第48-54页 |
| ·诱饵质粒的构建 | 第48页 |
| ·酵母菌株的筛选 | 第48-49页 |
| ·酵母菌株AH109的培养 | 第48-49页 |
| ·酵母菌株的表型筛选 | 第49页 |
| ·酵母菌株对诱饵质粒的表达 | 第49-50页 |
| ·酵母双杂交筛选人脑cDNA文库 | 第50-51页 |
| ·与禽流感核蛋白互作的蛋白 | 第51-54页 |
| 5 小结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 附录 | 第64-69页 |
