猪结合珠蛋白单克隆抗体的制备及初步应用
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略语表 | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-18页 |
| 1 结合珠蛋白国内外研究现状 | 第11-17页 |
| ·Hp的基本结构 | 第11页 |
| ·Hp的生物学特征 | 第11-12页 |
| ·Hp的合成和降解 | 第11-12页 |
| ·Hp表达的调节 | 第12页 |
| ·Hp的生物学功能 | 第12-14页 |
| ·结合游离的血红蛋白 | 第12-13页 |
| ·间接抑菌 | 第13页 |
| ·抗氧化 | 第13页 |
| ·抑制组织蛋白酶活性 | 第13页 |
| ·血管生成 | 第13-14页 |
| ·免疫调节活性 | 第14页 |
| ·Hp在兽医领域的应用 | 第14-15页 |
| ·诊断动物疾病 | 第14-15页 |
| ·猪肉安全评价 | 第15页 |
| ·应激反应的检测指标 | 第15页 |
| ·与妊娠、分娩、难产的关系 | 第15页 |
| ·Hp的检测方法研究进展 | 第15-17页 |
| ·电泳法 | 第15-16页 |
| ·分光光度法 | 第16页 |
| ·火箭免疫电泳 | 第16页 |
| ·SDS-PAGE印迹法 | 第16页 |
| ·免疫比浊法 | 第16页 |
| ·放射免疫法 | 第16-17页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第17页 |
| 2 本研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 第二章 猪结合珠蛋白单抗和多抗的制备及初步应用 | 第18-46页 |
| 1 材料与方法 | 第18-28页 |
| ·实验材料 | 第18-21页 |
| ·载体及菌株 | 第18-19页 |
| ·主要试剂 | 第19-20页 |
| ·主要器材 | 第20页 |
| ·实验动物及细胞 | 第20页 |
| ·试剂配制 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-28页 |
| ·猪Hp的克隆表达 | 第21-24页 |
| ·猪Hp单克隆抗体的制备和纯化 | 第24-27页 |
| ·猪Hp多克隆抗体的制备和纯化 | 第27页 |
| ·猪Hp夹心ELISA检测方法的初步建立 | 第27-28页 |
| ·Hp在猪各脏器组织中分布研究 | 第28页 |
| 2 结果与分析 | 第28-42页 |
| ·猪hp基因的克隆与表达的结果与分析 | 第28-31页 |
| ·hp基因的PCR扩增 | 第28-29页 |
| ·猪hp基因的克隆与鉴定 | 第29页 |
| ·重组质粒的构建及鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组蛋白的诱导表达和纯化 | 第30-31页 |
| ·猪Hp单克隆抗体的制备及鉴定 | 第31-36页 |
| ·His-Hp最佳工作浓度的确定 | 第31-32页 |
| ·免疫小鼠血清抗体效价的测定 | 第32页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选与杂交瘤细胞株的建立 | 第32-33页 |
| ·阳性杂交瘤细胞染色体分析 | 第33页 |
| ·腹水的制备及抗体效价的测定 | 第33-34页 |
| ·单抗3B4、3C8、1F10亲和力测定 | 第34页 |
| ·Hp单抗的纯化 | 第34-35页 |
| ·Hp单抗特异性的测定 | 第35-36页 |
| ·酶标3B4效价的测定 | 第36页 |
| ·猪Hp多克隆抗体的制备和纯化 | 第36-37页 |
| ·免疫家兔血清抗体效价的测定 | 第36-37页 |
| ·Hp多抗的纯化 | 第37页 |
| ·猪Hp夹心ELISA检测方法的初步建立 | 第37-39页 |
| ·酶标板孔间变异系数的检测 | 第37-38页 |
| ·捕获抗体和检测抗体最适工作浓度的确定 | 第38页 |
| ·Hp夹心ELISA标准曲线的制作 | 第38-39页 |
| ·Hp在猪各脏器组织中分布研究 | 第39-42页 |
| ·最佳反应条件的确定 | 第39-40页 |
| ·Hp在各脏器中的分布 | 第40-42页 |
| 3 讨论 | 第42-46页 |
| ·检测蛋白的选择 | 第42-43页 |
| ·原核表达载体的选择 | 第43页 |
| ·融合蛋白的表达及包涵体的提取 | 第43页 |
| ·抗体的制备 | 第43-44页 |
| ·抗体标记物和标记方法的选择 | 第44页 |
| ·猪Hp夹心ELISA检测方法的标准化 | 第44-45页 |
| ·免疫组化法检测Hp在各脏器中的分布情况 | 第45-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 附录1:猪hp基因片断序列 | 第51-52页 |
| 附录2:作者简介 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53页 |
