| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 第1章 文献综述 | 第9-23页 |
| 1.1 抗生素的作用机理 | 第9-10页 |
| 1.2 细菌的耐药机制 | 第10-13页 |
| 1.2.1 酶的灭活作用 | 第10页 |
| 1.2.2 改变抗生素与细菌的作用靶位 | 第10-11页 |
| 1.2.3 细菌细胞膜通透性的改变 | 第11页 |
| 1.2.4 细菌的外排泵系统 | 第11-12页 |
| 1.2.5 多重耐药性研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3 基因组编辑技术 | 第13-16页 |
| 1.3.1 CRISPR技术 | 第13-15页 |
| 1.3.2 基于CRISPR可追踪基因组工程 | 第15-16页 |
| 1.4 大肠杆菌调控因子 | 第16-18页 |
| 1.4.1 微生物的代谢调控网络 | 第16-17页 |
| 1.4.2 大肠杆菌调控因子 | 第17-18页 |
| 1.5 调控因子与细菌抗生素耐受性研究进展 | 第18-20页 |
| 1.5.1 实验室适应性进化获得细菌耐受性 | 第18-19页 |
| 1.5.2 CREATE及细菌耐药性 | 第19-20页 |
| 1.6 本课题的研究内容和技术路线 | 第20-23页 |
| 第2章 材料与方法 | 第23-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-27页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第23-24页 |
| 2.1.2 实验溶液和配制方法 | 第24页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第24-26页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第26页 |
| 2.1.5 培养基 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-43页 |
| 2.2.1 标准PCR和融合PCR | 第27-28页 |
| 2.2.2 PCR片段的回收和纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.3 质粒的构建 | 第29-31页 |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
| 2.2.5 大肠杆菌质粒的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.6 大肠杆菌化转感受态细胞的制备和转化 | 第32-33页 |
| 2.2.7 大肠杆菌电转感受态细胞的制备和转化 | 第33-34页 |
| 2.2.8 大肠杆菌基因组的提取 | 第34页 |
| 2.2.9 抗生素最小抑菌浓度的测定 | 第34页 |
| 2.2.10 基于CRISPR可追踪基因组工程 | 第34-38页 |
| 2.2.11 突变重构技术 | 第38-39页 |
| 2.2.12 菌体浓度的测定 | 第39页 |
| 2.2.13 Real-time荧光定量PCR | 第39-41页 |
| 2.2.14 引物合成和测序 | 第41-43页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第43-67页 |
| 3.1 CREATE文库的设计与构建 | 第43-44页 |
| 3.2 抗生素最小抑菌浓度的测定 | 第44-45页 |
| 3.3 基于CREATE大肠杆菌全局调控因子突变 | 第45-46页 |
| 3.4 不同抗生素耐受性菌群的筛选 | 第46-48页 |
| 3.4.1 多西环素胁迫条件下的筛选 | 第47页 |
| 3.4.2 甲砜霉素胁迫条件下的筛选 | 第47-48页 |
| 3.5 全局调控因子突变适应度分析 | 第48-49页 |
| 3.6 耐多西环素大肠杆菌突变菌株的重构 | 第49-57页 |
| 3.6.1 耐受多西环素SoxR突变菌株的重构 | 第49-54页 |
| 3.6.2 SoxR I120E与 G121P突变菌株重构 | 第54页 |
| 3.6.3 soxR基因过表达菌株的构建 | 第54-56页 |
| 3.6.4 soxR基因敲除菌株的构建 | 第56-57页 |
| 3.7 耐甲砜霉素大肠杆菌突变的重构 | 第57页 |
| 3.8 大肠杆菌重构菌株对多西环素耐受性分析 | 第57-59页 |
| 3.8.1 SoxR突变对大肠杆菌耐受多西环素的影响 | 第57-58页 |
| 3.8.2 soxR基因敲除、过表达对大肠杆菌耐受多西环素的影响 | 第58-59页 |
| 3.9 大肠杆菌SoxR突变重构菌株耐受多西环素的调控机理分析 | 第59-63页 |
| 3.9.1 SoxR相关的转录激活机制及其蛋白结构分析 | 第59-60页 |
| 3.9.2 SoxR突变对下游调控基因的转录水平的影响 | 第60-63页 |
| 3.10 大肠杆菌重构菌株对甲砜霉素耐受性分析 | 第63-64页 |
| 3.10.1 SoxR突变对大肠杆菌耐受甲砜霉素的影响 | 第63页 |
| 3.10.2 大肠杆菌SoxR突变重构菌株耐受甲砜霉素的调控机理分析 | 第63-64页 |
| 3.11 大肠杆菌SoxR突变重构菌株的抗生素多重耐受性 | 第64-67页 |
| 第4章 结论与展望 | 第67-69页 |
| 4.1 实验结论 | 第67页 |
| 4.2 创新点 | 第67-68页 |
| 4.3 展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 附录 | 第75-77页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
