| 摘要 | 第3-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| Chapter 1 Developing a colorimetric assay for Fe(Ⅱ)/2-oxoglutarate-dependentdioxygenase | 第11-47页 |
| 1.1 Introduction | 第11-22页 |
| 1.1.1 Fe(Ⅱ)/2-oxoglutarate-dependent dioxygenases (2-OGDs) | 第11页 |
| 1.1.2 Enzymatic reactions catalysed by 2-OGDs | 第11-12页 |
| 1.1.3 Structural and mechanistic features of 2-OGDs | 第12-15页 |
| 1.1.4 Biological roles of 2-OGDs | 第15-18页 |
| 1.1.5 Therapeutic inhibition of 2-OGDs | 第18-19页 |
| 1.1.6 Assays for 2-OGDs | 第19-22页 |
| 1.2 Materials | 第22-30页 |
| 1.2.1 Strains and plasmids | 第22-23页 |
| 1.2.2 Primers | 第23页 |
| 1.2.3 Media and buffers | 第23-26页 |
| 1.2.4 Important reagents and kits | 第26-29页 |
| 1.2.5 Equipments | 第29-30页 |
| 1.3 Experimental Methods | 第30-40页 |
| 1.3.1 Preparation of E. coli BL21 and DH5α competent cells | 第30-31页 |
| 1.3.2 Construction of the plasmids | 第31-36页 |
| 1.3.3 Protein expression and purification | 第36-37页 |
| 1.3.4 Enzyme assays | 第37-39页 |
| 1.3.5 Correlation of HPLC assay for ectoine hydroxylase with suc CD coupledcolorimetric assay | 第39-40页 |
| 1.3.6 Data analysis | 第40页 |
| 1.4 Results and discussion | 第40-47页 |
| Chapter 2 Investigation of metallocofactor of recombinant Epstein Barr Virusribonucleotide reductase | 第47-69页 |
| 2.1 Introduction | 第47-57页 |
| 2.1.1 Epstein Barr virus | 第47页 |
| 2.1.2 Ribonucleotide reductases | 第47-57页 |
| 2.2 Materials | 第57-58页 |
| 2.2.1 Strains and plasmids | 第57-58页 |
| 2.2.2 Primers | 第58页 |
| 2.3 Experimental Methods | 第58-61页 |
| 2.3.1 Construction of the plasmids | 第58-59页 |
| 2.3.2 Protein expression and purification | 第59-60页 |
| 2.3.3 Reconstitution of apo EBV RNR β subunits to generate a Fe(III)2-Y·cofactor | 第60页 |
| 2.3.4 Enzyme activity assays | 第60页 |
| 2.3.5 Detection conditions for HPLC | 第60-61页 |
| 2.4 Results and discussion | 第61-69页 |
| 2.4.1 Sequence alignment | 第61-62页 |
| 2.4.2 Protein purification | 第62-65页 |
| 2.4.3 UV-Vis spectrum of tyrosyl radical | 第65-66页 |
| 2.4.4 Enzyme activity assays | 第66-69页 |
| Chapter 3 Experimental Conclusions and Prospects | 第69-71页 |
| 3.1 Experimental Conclusions | 第69-70页 |
| 3.2 Prospects | 第70-71页 |
| References | 第71-85页 |
| Appendices | 第85-87页 |
| Notes on publications and participation in scientific research | 第87-89页 |
| Acknowledgements | 第89页 |
