致谢 | 第1-5页 |
中文摘要 | 第5-10页 |
英文摘要 | 第10-16页 |
中英文/缩写词对照表 | 第16-17页 |
目次 | 第17-20页 |
引言 | 第20-23页 |
实验仪器与材料 | 第23-25页 |
1 仪器 | 第23页 |
2 药物与主要试剂 | 第23-24页 |
3 实验动物及细胞株 | 第24-25页 |
实验方法 | 第25-35页 |
1.细胞培养 | 第25-26页 |
2.分化细胞初步鉴定 | 第26页 |
·细胞形态观察 | 第26页 |
·免疫细胞化学 | 第26页 |
3.蛋白质分离检测 | 第26-30页 |
·双向电泳 | 第26-30页 |
·质谱鉴定 | 第30页 |
·数据库检索 | 第30页 |
4.逆转录-聚合酶链反应 | 第30-32页 |
·收集样本 | 第30页 |
·Trizol法提取细胞总mRNA | 第30页 |
·逆转录 | 第30页 |
·PCR扩增 | 第30-32页 |
5.免疫细胞化学法(Immunocytochemistry)检测蛋白表达法 | 第32页 |
6.Western-blot检测蛋白表达 | 第32-33页 |
7.MTT法检测细胞毒性 | 第33页 |
8.分化率的测定 | 第33-34页 |
9.蛋白酶体活性的测定 | 第34页 |
·、提取蛋白 | 第34页 |
·、测定蛋白酶体活性 | 第34页 |
10.数据分析 | 第34-35页 |
第一部分 ICA诱导小鼠ES细胞体外定向分化为心肌细胞的双向电泳 | 第35-48页 |
1 实验结果 | 第35-45页 |
·细胞形态学观察 | 第35-36页 |
·双向电泳分离差异表达蛋白图和蛋白质质谱鉴定 | 第36-43页 |
·蛋白表达的基因水平验证 | 第43-44页 |
·蛋白表达的免疫荧光化学验证 | 第44-45页 |
2 讨论 | 第45-47页 |
3 小结 | 第47-48页 |
第二部分 泛素-蛋白酶体(UPS)系统在ICA诱导小鼠ES细胞定向分化为心肌细胞过程中的作用研究 | 第48-55页 |
1 实验结果 | 第48-53页 |
·MTT测定蛋白酶体抑制剂(Epoxomicin)对小鼠ES细胞的毒性 | 第48-49页 |
·Epoxomicin对ES细胞分化为心肌细胞的分化率影响 | 第49-50页 |
·ICA对ES细胞定向心肌细胞分化中UPS的影响 | 第50-51页 |
·蛋白酶体活性测定 | 第51页 |
·western blot检测泛素化蛋白的表达 | 第51-52页 |
·免疫荧光化学检测泛素水解酶1(UCH-1)的表达 | 第52-53页 |
2 讨论 | 第53-54页 |
3 小结 | 第54-55页 |
总结 | 第55-56页 |
论文创新点 | 第56-57页 |
参考文献 | 第57-59页 |
文献综述 干细胞定向分化蛋白组学研究进展 | 第59-66页 |
作者简历及在读期间所取得的科研成果 | 第66页 |