| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 前言 | 第13-29页 |
| 1.1 恩拉霉素的功能及应用价值 | 第13-16页 |
| 1.1.1 恩拉霉素的抗菌活性及抑菌机制 | 第13-15页 |
| 1.1.2 恩拉霉素的应用 | 第15-16页 |
| 1.2 恩拉霉素的生物合成及研究进展 | 第16-23页 |
| 1.2.1 恩拉霉素的结构和性质 | 第16-18页 |
| 1.2.2 恩拉霉素生物合成 | 第18-23页 |
| 1.2.2.1 恩拉霉素的生物合成基因 | 第18-20页 |
| 1.2.2.2 恩拉霉素的生物合成途径 | 第20-23页 |
| 1.2.3 恩拉霉素开发应用进展 | 第23页 |
| 1.3 微生物菌种选育技术 | 第23-25页 |
| 1.3.1 传统育种策略 | 第24页 |
| 1.3.2 基因组重排育种 | 第24-25页 |
| 1.4 核糖体工程 | 第25-27页 |
| 1.4.1 核糖体工程概要 | 第25-26页 |
| 1.4.2 核糖体工程的应用 | 第26-27页 |
| 1.5 金属离子对微生物生长代谢的影响 | 第27-28页 |
| 1.5.1 金属离子的作用 | 第27页 |
| 1.5.2 金属离子在微生物生长发酵中的应用 | 第27-28页 |
| 1.6 本课题的研究目的和研究内容 | 第28-29页 |
| 1.6.1 研究目的 | 第28页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第28-29页 |
| 第二章 基因组重排选育恩拉霉素高产菌株 | 第29-51页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-32页 |
| 2.1.1 出发菌株及菌种保藏 | 第29页 |
| 2.1.2 培养基 | 第29-30页 |
| 2.1.3 药品与试剂 | 第30页 |
| 2.1.4 溶液 | 第30-31页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第31-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-37页 |
| 2.2.1 ~(60)Coγ诱变——基因组重排亲本库的建立 | 第32-33页 |
| 2.2.1.1 孢子悬浮液的制备 | 第32页 |
| 2.2.1.2 ~(60)Coγ辐照诱变 | 第32页 |
| 2.2.1.3 致死率和突变率 | 第32页 |
| 2.2.1.4 琼脂块初筛法 | 第32-33页 |
| 2.2.1.5 摇瓶复筛 | 第33页 |
| 2.2.2 基因组重排 | 第33-35页 |
| 2.2.2.1 菌种培养 | 第33-34页 |
| 2.2.2.2 原生质体制备 | 第34页 |
| 2.2.2.3 原生质体融合 | 第34页 |
| 2.2.2.4 原生质体再生 | 第34-35页 |
| 2.2.2.5 基因组重排 | 第35页 |
| 2.2.2.6 重组菌株的稳定性 | 第35页 |
| 2.2.3 恩拉霉素提取 | 第35页 |
| 2.2.4 恩拉霉素测定 | 第35-37页 |
| 2.2.4.1 恩拉霉素生物检测标准曲线的制作 | 第35-36页 |
| 2.2.4.2 恩拉霉素液相检测 | 第36-37页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第37-49页 |
| 2.3.1 ~(60)Coγ诱变育种结果 | 第37-38页 |
| 2.3.1.1 不同剂量~(60)Coγ射线对L-609菌株的诱变效果 | 第37页 |
| 2.3.1.2 菌种库建立 | 第37-38页 |
| 2.3.2 出发菌株链霉素的最小抑制浓度试验 | 第38-39页 |
| 2.3.3 基因组重排育种结果 | 第39-44页 |
| 2.3.3.1 第一轮原声质体融合及筛选 | 第39-40页 |
| 2.3.3.2 第二轮原声质体融合及筛选 | 第40-41页 |
| 2.3.3.3 第三轮原声质体融合及筛选 | 第41页 |
| 2.3.3.4 第四轮原声质体融合及筛选 | 第41-42页 |
| 2.3.3.5 第五轮原声质体融合及筛选 | 第42-43页 |
| 2.3.3.6 基因组重排育种结果 | 第43-44页 |
| 2.3.4 菌株EL-30的罐上培养及其发酵产物液相验证 | 第44-49页 |
| 2.3.4.1 菌株EL-30发酵罐试验 | 第44-47页 |
| 2.3.4.2 菌株EL-30发酵产物的液相验证 | 第47-49页 |
| 2.5 小结 | 第49-51页 |
| 第三章 金属离子对恩拉霉素产生菌生长代谢及恩拉霉素合成的影响 | 第51-75页 |
| 3.1 实验材料 | 第52-53页 |
| 3.1.1 菌种 | 第52页 |
| 3.1.2 培养基 | 第52页 |
| 3.1.3 主要药品与试剂 | 第52页 |
| 3.1.4 溶液配制 | 第52-53页 |
| 3.1.5 主要仪器设备 | 第53页 |
| 3.2 实验方法 | 第53-57页 |
| 3.2.1 菌种培养 | 第53-54页 |
| 3.2.1.1 斜面活化培养方法 | 第53页 |
| 3.2.1.2 种子摇瓶培养方法 | 第53-54页 |
| 3.2.1.3 发酵摇瓶培养方法 | 第54页 |
| 3.2.2 发酵参数测定 | 第54页 |
| 3.2.2.1 发酵液总糖测定 | 第54页 |
| 3.2.2.2 发酵液氨基氮测定 | 第54页 |
| 3.2.2.3 菌体干重测定 | 第54页 |
| 3.2.2.4 发酵液效价测定方法 | 第54页 |
| 3.2.2.5 氨基酸测定 | 第54页 |
| 3.2.3 有机酸测定 | 第54-56页 |
| 2.3.3.1 色谱条件 | 第54-55页 |
| 2.3.3.2 发酵液中有机酸的定性及测定 | 第55页 |
| 2.3.3.3 有机酸标准曲线的绘制 | 第55-56页 |
| 3.2.4 荧光染色 | 第56-57页 |
| 3.2.4.1 摇床培养 | 第56页 |
| 3.2.4.2 活细胞染色 | 第56-57页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第57-72页 |
| 3.3.1 不同金属离子对放线菌生长和恩拉霉素合成的影响 | 第57-59页 |
| 3.3.2 Mn~(2+)离子对恩拉霉素发酵代谢的影响 | 第59-61页 |
| 3.3.2.1 发酵液pH和菌浓的变化趋势 | 第59页 |
| 3.3.2.2 发酵液中糖代谢、氨基氮和恩拉霉素产量的影响 | 第59-61页 |
| 3.3.3 Mn~(2+)对恩拉霉素发酵过程中前体氨基酸的影响 | 第61-63页 |
| 3.3.4 Mn~(2+)对恩拉霉素发酵过程中有机酸代谢的影响 | 第63-67页 |
| 3.3.4.1 发酵液中有机酸组分的定性 | 第63-64页 |
| 3.3.4.2 Mn~(2+)对恩拉霉素发酵过程中有机酸代谢的影响 | 第64-66页 |
| 3.3.4.3 添加乙酸盐和莽草酸对恩拉霉素生物合成的影响 | 第66-67页 |
| 3.3.5 Mn~(2+)对恩拉霉素产生菌形态发育分化的影响 | 第67-72页 |
| 3.3.5.1 Mn~(2+)对恩拉霉素产生菌发育分化的影响 | 第67-70页 |
| 3.3.5.2 Mn~(2+)对恩拉霉素产生菌菌丝球结团性的影响 | 第70-72页 |
| 3.4 小结 | 第72-75页 |
| 第四章 结论与展望 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 附录 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
