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恩拉霉素产生菌株基因组重排育种

摘要第4-6页
ABSTRACT第6-8页
第一章 前言第13-29页
    1.1 恩拉霉素的功能及应用价值第13-16页
        1.1.1 恩拉霉素的抗菌活性及抑菌机制第13-15页
        1.1.2 恩拉霉素的应用第15-16页
    1.2 恩拉霉素的生物合成及研究进展第16-23页
        1.2.1 恩拉霉素的结构和性质第16-18页
        1.2.2 恩拉霉素生物合成第18-23页
            1.2.2.1 恩拉霉素的生物合成基因第18-20页
            1.2.2.2 恩拉霉素的生物合成途径第20-23页
        1.2.3 恩拉霉素开发应用进展第23页
    1.3 微生物菌种选育技术第23-25页
        1.3.1 传统育种策略第24页
        1.3.2 基因组重排育种第24-25页
    1.4 核糖体工程第25-27页
        1.4.1 核糖体工程概要第25-26页
        1.4.2 核糖体工程的应用第26-27页
    1.5 金属离子对微生物生长代谢的影响第27-28页
        1.5.1 金属离子的作用第27页
        1.5.2 金属离子在微生物生长发酵中的应用第27-28页
    1.6 本课题的研究目的和研究内容第28-29页
        1.6.1 研究目的第28页
        1.6.2 研究内容第28-29页
第二章 基因组重排选育恩拉霉素高产菌株第29-51页
    2.1 实验材料第29-32页
        2.1.1 出发菌株及菌种保藏第29页
        2.1.2 培养基第29-30页
        2.1.3 药品与试剂第30页
        2.1.4 溶液第30-31页
        2.1.5 主要仪器设备第31-32页
    2.2 实验方法第32-37页
        2.2.1 ~(60)Coγ诱变——基因组重排亲本库的建立第32-33页
            2.2.1.1 孢子悬浮液的制备第32页
            2.2.1.2 ~(60)Coγ辐照诱变第32页
            2.2.1.3 致死率和突变率第32页
            2.2.1.4 琼脂块初筛法第32-33页
            2.2.1.5 摇瓶复筛第33页
        2.2.2 基因组重排第33-35页
            2.2.2.1 菌种培养第33-34页
            2.2.2.2 原生质体制备第34页
            2.2.2.3 原生质体融合第34页
            2.2.2.4 原生质体再生第34-35页
            2.2.2.5 基因组重排第35页
            2.2.2.6 重组菌株的稳定性第35页
        2.2.3 恩拉霉素提取第35页
        2.2.4 恩拉霉素测定第35-37页
            2.2.4.1 恩拉霉素生物检测标准曲线的制作第35-36页
            2.2.4.2 恩拉霉素液相检测第36-37页
    2.3 结果与讨论第37-49页
        2.3.1 ~(60)Coγ诱变育种结果第37-38页
            2.3.1.1 不同剂量~(60)Coγ射线对L-609菌株的诱变效果第37页
            2.3.1.2 菌种库建立第37-38页
        2.3.2 出发菌株链霉素的最小抑制浓度试验第38-39页
        2.3.3 基因组重排育种结果第39-44页
            2.3.3.1 第一轮原声质体融合及筛选第39-40页
            2.3.3.2 第二轮原声质体融合及筛选第40-41页
            2.3.3.3 第三轮原声质体融合及筛选第41页
            2.3.3.4 第四轮原声质体融合及筛选第41-42页
            2.3.3.5 第五轮原声质体融合及筛选第42-43页
            2.3.3.6 基因组重排育种结果第43-44页
        2.3.4 菌株EL-30的罐上培养及其发酵产物液相验证第44-49页
            2.3.4.1 菌株EL-30发酵罐试验第44-47页
            2.3.4.2 菌株EL-30发酵产物的液相验证第47-49页
    2.5 小结第49-51页
第三章 金属离子对恩拉霉素产生菌生长代谢及恩拉霉素合成的影响第51-75页
    3.1 实验材料第52-53页
        3.1.1 菌种第52页
        3.1.2 培养基第52页
        3.1.3 主要药品与试剂第52页
        3.1.4 溶液配制第52-53页
        3.1.5 主要仪器设备第53页
    3.2 实验方法第53-57页
        3.2.1 菌种培养第53-54页
            3.2.1.1 斜面活化培养方法第53页
            3.2.1.2 种子摇瓶培养方法第53-54页
            3.2.1.3 发酵摇瓶培养方法第54页
        3.2.2 发酵参数测定第54页
            3.2.2.1 发酵液总糖测定第54页
            3.2.2.2 发酵液氨基氮测定第54页
            3.2.2.3 菌体干重测定第54页
            3.2.2.4 发酵液效价测定方法第54页
            3.2.2.5 氨基酸测定第54页
        3.2.3 有机酸测定第54-56页
            2.3.3.1 色谱条件第54-55页
            2.3.3.2 发酵液中有机酸的定性及测定第55页
            2.3.3.3 有机酸标准曲线的绘制第55-56页
        3.2.4 荧光染色第56-57页
            3.2.4.1 摇床培养第56页
            3.2.4.2 活细胞染色第56-57页
    3.3 结果与讨论第57-72页
        3.3.1 不同金属离子对放线菌生长和恩拉霉素合成的影响第57-59页
        3.3.2 Mn~(2+)离子对恩拉霉素发酵代谢的影响第59-61页
            3.3.2.1 发酵液pH和菌浓的变化趋势第59页
            3.3.2.2 发酵液中糖代谢、氨基氮和恩拉霉素产量的影响第59-61页
        3.3.3 Mn~(2+)对恩拉霉素发酵过程中前体氨基酸的影响第61-63页
        3.3.4 Mn~(2+)对恩拉霉素发酵过程中有机酸代谢的影响第63-67页
            3.3.4.1 发酵液中有机酸组分的定性第63-64页
            3.3.4.2 Mn~(2+)对恩拉霉素发酵过程中有机酸代谢的影响第64-66页
            3.3.4.3 添加乙酸盐和莽草酸对恩拉霉素生物合成的影响第66-67页
        3.3.5 Mn~(2+)对恩拉霉素产生菌形态发育分化的影响第67-72页
            3.3.5.1 Mn~(2+)对恩拉霉素产生菌发育分化的影响第67-70页
            3.3.5.2 Mn~(2+)对恩拉霉素产生菌菌丝球结团性的影响第70-72页
    3.4 小结第72-75页
第四章 结论与展望第75-77页
参考文献第77-83页
附录第83-84页
致谢第84-85页

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