| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 第1章 前言 | 第15-31页 |
| 1.1 那西肽的理化性质与合成研究 | 第15-20页 |
| 1.1.1那西肽的结构和理化性质 | 第15-16页 |
| 1.1.2 那西肽的合成途径研究 | 第16-19页 |
| 1.1.2.1 那西肽的生物合成前体 | 第16-17页 |
| 1.1.2.2 生物合成基因 | 第17-19页 |
| 1.1.3 那西肽的抑菌机制 | 第19页 |
| 1.1.4 那西肽的安全性评价 | 第19-20页 |
| 1.1.4.1 那西肽的残留性 | 第19页 |
| 1.1.4.2 那西肽的耐药性 | 第19-20页 |
| 1.1.4.3 对环境的影响 | 第20页 |
| 1.1.4.4 那西肽的毒性 | 第20页 |
| 1.1.5 那西肽的应用 | 第20页 |
| 1.2 基因组重排技术 | 第20-23页 |
| 1.2.1 基因组重排技术原理与特点 | 第20-21页 |
| 1.2.2 基因组重排的过程 | 第21-23页 |
| 1.2.2.1 出发菌株的获得 | 第21页 |
| 1.2.2.2 递归式原生质体融合过程 | 第21-22页 |
| 1.2.2.3 口的菌株的获取 | 第22-23页 |
| 1.3 链霉素抗性突变株的筛选 | 第23-24页 |
| 1.4 菌种保藏方法 | 第24页 |
| 1.4.1 甘油管保藏 | 第24页 |
| 1.4.2 安瓿管保藏 | 第24页 |
| 1.5 那两肽的生产工艺 | 第24-27页 |
| 1.5.1 那西肽的发酵生产 | 第24-25页 |
| 1.5.2 那西肽的提取工艺 | 第25-27页 |
| 1.5.2.1 溶剂萃取法粗提 | 第25-27页 |
| 1.5.2.2 精制 | 第27页 |
| 1.5.3 那西肽的检测方法 | 第27页 |
| 1.6 形态分化与生长代谢 | 第27-28页 |
| 1.7 大孔吸附树脂的应用 | 第28-29页 |
| 1.8 研究目的、内容及路线 | 第29-31页 |
| 1.8.1 研究目的 | 第29页 |
| 1.8.2 研究内容 | 第29页 |
| 1.8.3 实验路线 | 第29-31页 |
| 第2章 诱变及基因组重排育种那西肽高产菌株 | 第31-55页 |
| 2.1 实验材料 | 第31-33页 |
| 2.1.1 出发菌株 | 第31页 |
| 2.1.2 培养基 | 第31-32页 |
| 2.1.3 溶液 | 第32页 |
| 2.1.3.1 微量元素(%) | 第32页 |
| 2.1.3.2 高渗溶液P(%) | 第32页 |
| 2.1.3.3 TES缓冲液 | 第32页 |
| 2.1.3.4 酶溶液 | 第32页 |
| 2.1.3.5 生理盐水 | 第32页 |
| 2.1.4 药品与试剂 | 第32页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第32-33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-36页 |
| 2.2.1 那西肽产生菌的诱变育种 | 第33-34页 |
| 2.2.1.1 诱变及筛选流程 | 第33页 |
| 2.2.1.2 孢子悬液的制备 | 第33页 |
| 2.2.1.3 LiCl最适浓度的选择 | 第33页 |
| 2.2.1.4 ~(60)Co-y最佳诱变剂量的选择 | 第33-34页 |
| 2.2.2 原生质体制备 | 第34页 |
| 2.2.3 原生质体融合 | 第34-35页 |
| 2.2.4 原生质体再生 | 第35页 |
| 2.2.5 基因组重排 | 第35页 |
| 2.2.6 重组菌株的稳定性 | 第35-36页 |
| 2.3 那西肽效价测定 | 第36-38页 |
| 2.3.1 生测法检测那西肽产量 | 第36-37页 |
| 2.3.2 高效液相色谱法检测那西肽含量 | 第37-38页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第38-53页 |
| 2.4.1 诱变育种结果 | 第38-40页 |
| 2.4.1.1 LiCl 浓度的选择 | 第38-39页 |
| 2.4.1.2 ~(60)Co-γ诱变剂量的选择 | 第39页 |
| 2.4.1.3 诱变筛选结果 | 第39-40页 |
| 2.4.2 融合出发菌株链霉素的最小抑制浓度试验 | 第40-43页 |
| 2.4.3 原生质体的形成与再生条件选择 | 第43-47页 |
| 2.4.3.1 菌丝打碎 | 第43页 |
| 2.4.3.2 溶菌酶浓度 | 第43-44页 |
| 2.4.3.3 酶解时间 | 第44-45页 |
| 2.4.3.4 酶解温度 | 第45页 |
| 2.4.3.5 融合温度 | 第45-46页 |
| 2.4.3.6 融合时间 | 第46-47页 |
| 2.4.4 基因组重排育种结果 | 第47-52页 |
| 2.4.4.1 第一轮原生质体融合筛选 | 第47-49页 |
| 2.4.4.2 第一轮原生质体融合筛选 | 第49页 |
| 2.4.4.3 第三轮原生质体融合筛选 | 第49页 |
| 2.4.4.4 第四轮原生质体融合筛选 | 第49-51页 |
| 2.4.4.5 基因重排育种结果 | 第51-52页 |
| 2.4.5 菌株D92发酵产物那西肽的提取验证 | 第52-53页 |
| 2.5 小结 | 第53-55页 |
| 第3章 高产菌株的形态分化、生长代谢及遗传特性研究 | 第55-69页 |
| 3.1 实验材料 | 第55-56页 |
| 3.1.1 菌种 | 第55页 |
| 3.1.2 培养基 | 第55页 |
| 3.1.3 主要化学试剂 | 第55页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第55-56页 |
| 3.2 实验方法 | 第56-58页 |
| 3.2.1 种子培养 | 第56页 |
| 3.2.2 荧光染色 | 第56页 |
| 3.2.2.1 摇床培养 | 第56页 |
| 3.2.2.2 活细胞染色 | 第56页 |
| 3.2.3 发酵参数测定 | 第56-57页 |
| 3.2.3.1 菌体湿重测定 | 第56页 |
| 3.2.3.2 那西肽效价测定 | 第56-57页 |
| 3.2.4 融合株抗性表征 | 第57页 |
| 3.2.5 DNA抽提 | 第57-58页 |
| 3.2.6 核糖体S12蛋白位点分析 | 第58页 |
| 3.3 实验结果 | 第58-67页 |
| 3.3.1 原始菌株和融合菌株D92在液体深层培养中菌丝形态分化 | 第58-62页 |
| 3.3.2 摇瓶发酵曲线与生长的关联 | 第62-64页 |
| 3.3.3 融合菌株那西肽抗性表征 | 第64-66页 |
| 3.3.4 融合高产菌株核糖体S12蛋白序列分析 | 第66-67页 |
| 3.4 小结 | 第67-69页 |
| 第4章 融合菌株D92罐上代谢及产物分离、纯化与验证 | 第69-83页 |
| 4.1 实验材料 | 第69-70页 |
| 4.1.1 菌种 | 第69页 |
| 4.1.2 培养基 | 第69页 |
| 4.1.3 主要试剂和仪器 | 第69-70页 |
| 4.1.3.1 主要试剂 | 第69页 |
| 4.1.3.2 主要仪器 | 第69-70页 |
| 4.2 试验方法 | 第70-72页 |
| 4.2.1 菌种培养 | 第70页 |
| 4.2.1.1 种子培养 | 第70页 |
| 4.2.1.2 10L罐上培养 | 第70页 |
| 4.2.2 参数测定 | 第70-71页 |
| 4.2.2.1 pH测定 | 第70页 |
| 4.2.2.2 DNS法测定发酵液还原糖和总糖 | 第70页 |
| 4.2.2.3 氨基氮含量测定 | 第70-71页 |
| 4.2.3 发酵产物分离提取 | 第71-72页 |
| 4.2.3.1 有机试剂法 | 第71页 |
| 4.2.3.2 大孔树脂的预处理及再生 | 第71页 |
| 4.2.3.3 静态吸附试验 | 第71页 |
| 4.2.3.4 解吸性能试验 | 第71-72页 |
| 4.2.3.5 树脂装柱及上样前准备 | 第72页 |
| 4.2.3.6 提取流程 | 第72页 |
| 4.3 实验结果 | 第72-82页 |
| 4.3.1 发酵罐试验 | 第72-73页 |
| 4.3.2 发酵产物分离、纯化 | 第73-76页 |
| 4.3.2.1 溶剂萃取法 | 第73-74页 |
| 4.3.2.2 不同大孔树脂静态吸附与解吸试验 | 第74页 |
| 4.3.2.3 最佳吸附pH的选择 | 第74-75页 |
| 4.3.2.4 最适洗脱剂的选择 | 第75页 |
| 4.3.2.5 大孔树脂D-101分离纯化那西肽 | 第75-76页 |
| 4.3.2.6 溶剂萃取和树脂吸附所得样品抑菌活性比较 | 第76页 |
| 4.3.3 提取结果验证 | 第76-82页 |
| 4.3.3.1 波长测定 | 第76-78页 |
| 4.3.3.2 薄层层析 | 第78页 |
| 4.3.3.3 高效液相 | 第78-80页 |
| 4.3.3.4 红外光谱分析 | 第80页 |
| 4.3.3.5 一级质游分析 | 第80-82页 |
| 4.4 小结 | 第82-83页 |
| 第5章 结论 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
