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桑树G蛋白信号基因的鉴定与非生物胁迫调控分子机理研究

摘要第9-13页
ABSTRACT第13-18页
第一章 文献综述第19-31页
    1.1 植物非生物胁迫信号传递的分子机制第19-23页
        1.1.1 非生物胁迫信号的感知第19-20页
        1.1.2 非生物胁迫信号的传递第20-23页
    1.2 植物G蛋白信号途径的研究进展第23-28页
        1.2.1 植物G蛋白信号途径的主要元件第23-24页
        1.2.2 植物G蛋白信号途径的功能第24-28页
    1.3 桑树响应非生物胁迫机制的研究进展第28-31页
第二章 引言第31-33页
    2.1 研究目的和意义第31页
    2.2 研究内容第31-32页
    2.3 研究路线第32-33页
第三章 桑树盐胁迫转录组学分析第33-65页
    3.1 材料与方法第33-36页
        3.1.1 供试材料第33页
        3.1.2 材料处理第33页
        3.1.3 RNA提取、cDNA文库构建和Illumina测序第33-34页
        3.1.4 数据组装和数据分析第34页
        3.1.5 权重共表达分析(WGCNA)第34页
        3.1.6 cDNA第一链合成和实时荧光定量PCR分析第34-36页
    3.2 结果与分析第36-62页
        3.2.1 RNA-seq测序数据和质量评估第36-37页
        3.2.2 转录本的功能注释第37-43页
        3.2.3 差异基因的鉴定第43页
        3.2.4 离子转运相关基因的分析第43页
        3.2.5 活性氧(ROS)清除相关基因的分析第43-45页
        3.2.6 信号识别和传递相关基因的分析第45-47页
        3.2.7 重要胁迫响应蛋白基因的分析第47页
        3.2.8 极显著差异基因的分析第47-51页
        3.2.9 不同品系中盐胁迫差异基因的分析第51页
        3.2.10 品系间差异基因分析第51-54页
        3.2.11 实时荧光定量PCR验证差异表达基因第54页
        3.2.12 权重共表达网络的构建与分析第54-62页
    3.3 小结与讨论第62-65页
        3.3.1 桑树通过多个生理途径响应盐胁迫第62页
        3.3.2 盐胁迫前处理赋予了植物的胁迫记忆第62-64页
        3.3.3 G蛋白信号可能是调控植物胁迫响应的重要途径第64-65页
第四章 桑树G蛋白信号基因的鉴定、生物信息学与表达模式分析第65-85页
    4.1 材料与方法第65-70页
        4.1.1 供试材料第65页
        4.1.2 川桑中G蛋白信号基因的获得第65页
        4.1.3 总RNA提取和cDNA第一链的合成第65-66页
        4.1.4 基因克隆第66-68页
        4.1.5 桑树异三聚体G蛋白信号基因的序列分析第68页
        4.1.6 酵母双杂交第68-70页
        4.1.7 不同胁迫处理桑树第70页
    4.2 结果与分析第70-82页
        4.2.1 桑树G蛋白信号基因的序列鉴定第70页
        4.2.2 桑树G蛋白信号蛋白的同源性与进化分析第70-76页
        4.2.3 桑树G蛋白信号蛋白的相互作用分析第76页
        4.2.4 桑树异三聚体G蛋白信号基因在不同组织中表达分析第76-79页
        4.2.5 桑树G蛋白信号基因在不同G蛋白效应物处理下的表达分析第79-82页
    4.3 小结与讨论第82-85页
        4.3.1 桑树中的G蛋白信号基因与其他陆地植物高度保守第82页
        4.3.2 桑树G蛋白信号基因的表达能够响应G蛋白效应物第82-83页
        4.3.3 桑树G蛋白信号基因的表达能够响应非生物胁迫和信号分子第83-85页
第五章 桑树G蛋白信号基因的转基因过表达分析第85-99页
    5.1 材料与方法第85-88页
        5.1.1 供试材料第85页
        5.1.2 转基因载体过表达载体的构建第85页
        5.1.3 农杆菌转化第85页
        5.1.4 叶盘法转化烟草第85-86页
        5.1.5 转基因植株的阳性检测第86页
        5.1.6 转基因植株的胁迫处理和生理指标检测第86-87页
        5.1.7 桑树和烟草中的可溶性糖含量测定第87-88页
        5.1.8 参与RGS内吞相关基因的qRT-PCR分析第88页
    5.2 结果与分析第88-96页
        5.2.1 转基因烟草的获得与分子鉴定第88页
        5.2.2 转基因烟草对盐胁迫和干旱的响应第88-91页
        5.2.3 参与RGS内吞相关基因的表达分析第91-96页
    5.3 小结与讨论第96-99页
        5.3.1 G蛋白信号在植物响应干旱和盐胁迫的功能保守第96页
        5.3.2 葡萄糖和细胞自噬介导G蛋白调控植物响应干旱和盐胁迫第96-99页
第六章 桑树MaRACK1的功能分析第99-125页
    6.1 材料与方法第99-106页
        6.1.1 供试材料第99页
        6.1.2 花粉介导法转化拟南芥第99-100页
        6.1.3 转基因植株的胁迫处理和生理指标检测第100页
        6.1.4 均一化酵母双杂交文库的构建第100-103页
        6.1.5 MaRACK1互作蛋白的筛选第103-104页
        6.1.6 MaRACK1互作蛋白的验证第104页
        6.1.7 MaRACK1互作蛋白编码基因的qRT-PCR分析第104-105页
        6.1.8 RACK1与G蛋白和RGS的相互作用分析第105-106页
    6.2 结果与分析第106-119页
        6.2.1 过表达MaRACK1的转基因拟南芥对盐胁迫和干旱的响应第106-109页
        6.2.2 拟南芥基因的表达模式分析第109页
        6.2.3 MaRACK1蛋白含量检测第109-111页
        6.2.4 过表达MaRACK1的转基因拟南芥的转录组学分析第111-115页
        6.2.5 MaRACK1互作蛋白的筛选与表达模式分析第115-118页
        6.2.6 RACK1与G蛋白信号蛋白的相互作用分析第118-119页
        6.2.7 MAPK信号途径蛋白与MaRACK1和G蛋白的相互作用分析第119页
    6.3 小结与讨论第119-125页
        6.3.1 RACK1负调控植物响应干旱和盐胁迫第119-122页
        6.3.2 RACK1可能不依赖于G蛋白调控植物响应干旱和盐胁迫第122页
        6.3.3 植物RACK1响应非生物胁迫的分子机制第122-125页
第七章 全文总结第125-129页
    1、桑树盐胁迫转录组学分析第125页
    2、桑树G蛋白信号响应非生物胁迫的分子机理研究第125-126页
    3、桑树RACK1响应非生物胁迫的分子机理研究第126-129页
论文创新点第129-131页
参考文献第131-139页
附录第139-173页
在读期间发表成果、参加会议及参研课题第173-175页
致谢第175-176页

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